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4.1 微生物反应器操作基础 微生物培养过程根据是否要求供氧,分为厌氧和好氧培养 。 深层培养 培养方式分类: 分批式操作(batch operation) 半分批式操作(semi-batch operation) 反复分批式操作(repeated batch operation) 反复半分批式操作(repeated semi-batch operation) 连续式操作(continuous operation) 4.2 分批式操作 是指基质一次性加入反应器内,在适宜条件下将微生物菌种接入,反应完成后将全部反应物料取出的操作方式。 半分批式操作 又称流加操作,是指先将一定量基质加入反应器内,在适宜条件下将微生物菌种接入反应器中,反应开始,反应过程中将特定的限制性基质按照一定要求加入到反应器内,以控制限制性基质保持一定,当反应终止时取出反应物料的操作方式 。 酵母、淀粉酶、某些氨基酸和抗生素等采用这种方式进行生产。 3、多级连续培养 多级连续培养系统是一具有n个串联反应器的连续反应系统。底物流经这一系统的流量为F,由物料衡算可得出菌体X、产物P及限制性基质S的衡算式。这些方程式成立的基本条件是,限制性基质由n-1号反应器流入n号反应器中立即与n号反应器内的反应物料充分混合均匀。其有关衡算式为 稳定状态下,以上三式左边为零。因此,有 理论上,反馈操作使菌体产率增大,但实际运用并不尽然。反应液中菌体的浓度取决于收率和底物消耗的数量,即 因此,无其它限制因子时,微生物菌体浓度在一定范围内受底物浓度的制约。如果采用控制底物浓度的方法来控制菌体浓度,可使无反馈反应系统中的菌体浓度达到反馈条件时的菌体浓度的同样数值,此时,反馈对于提高菌体产率并不显示优越性。相反,由于分离后反应液中菌体浓度降低,对菌体生产(如面包酵母生产)反而不利。 对于具有反馈的单级系统来讲,还要考虑排出反应液中菌体的浓度。菌体分离装置处的菌体恒算式为 拟稳定状态下初始流加速度F0可由(4-24)给出。 微生物每次培养都可能有微妙的变化,因此,无反馈控制的流加操作适用范围很窄。 4.3.2 有反馈控制的流加操作 阴沟肠杆菌定流量流加培养 甘油为基质进行阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)定流量流加培养的实验结果与计算机模拟结果如前图。图中(a)是甘油水溶液为流加基质的结果,如图4-4所示的那样,菌体浓度一定(XV以直线方式增加)。图中(b)甘油直接为流加基质,与甘油水溶液的不同,流加的基质全部被消耗,反应液的体积V一定,菌体浓度X按照直线方式增加。此时,确保了高浓度培养的成功。 4.4?连续式操作 连续操作有两大类型,即CSTR(continuous stirred tank reactor)型和CPFR(continuous plug flow tulular reactor)型。 根据达成稳定状态的方法不同,CSTR型连续操作,大致可分为三种。一是恒化器法(chemostat),二是恒浊器法(turbidstat),第三是营养物恒定法(nutristat)。 恒化器法是指在连续培养过程中,基质流加速度恒定,以调节微生物细胞的生长速率与恒定流量相适应的方法。 恒浊器法是指预先规定细胞浓度,通过基质流量控制,以适应细胞的既定浓度的方法。营养物恒定法是指通过流加一定成分,使培养基中的营养成分恒定的方法。实际应用中多采用恒化器法 。 单级CSTR培养系统 4.4.1 恒化器法连续操作 1、单级连续培养操作 上图所示的单级CSTR培养系统中,流入液中仅一种成分为微生物生长的限制性因子,其他成分在不发生抑制的条件下充分存在。反应过程中,菌体、限制性基质及产物的物料衡算式为 变化量=流入量+生成量-流出量 由于流入液中菌体与产物的浓度为零,因此,上述衡算式写成数学表达式为 式中, F为反应液流入与流出速度L/h, V为反应器内反应液的体积L, Sin为流入液中限制性底物的浓度mol/L, S为反应器内和流出液中限制性底物浓度mol/L, 其余符号同前。 以上式子两边同除以V,则 式中,D称为稀释率(dilution rate) 根据菌体得率和的定义式,以及Monod方程, 可改写成 稳定状态下,dX/dt=dS/dt=dP/dt=0,此时的菌体浓度、基质浓度和代谢产物浓度可分别表示为 事实上D是有一定限制的,就是要保证,即 微生物反应一般是在 条件下进行的,所以由上式,可以认为
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