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第17章 法医DNA分型 （供医学专业本科教学用） 郑州大学基础医学院法医学教研室 曾昭书 联系方式：zzs@zzu.edu.cn;一、概述;案例;;遗传物质的结构;人类基因组序列特点（1）;人类基因序列特点（2）;人类基因组序列特点（3）; 从遗传角度来讲，除同卵孪生子外每个人的DNA分子都不一样。具体体现在编码区序列的不同和重复序列中重复次数的差异。 ; 从遗传角度来讲，除同卵孪生子外每个人的DNA分子都不一样。具体体现在编码区序列的不同和重复序列中重复次数的差异。 同一个体体内各种有核细胞都是由同一受精卵分裂而来，故在同一个体中各种有核细胞内所含的DNA都是一样的。; 作为基因载体的DNA分子 不同个体中的独特性 同一个体中的统一性 ; 作为基因载体的DNA分子 不同个体中的独特性 同一个体中的统一性 法医DNA分析技术正是利用了DNA所具有的这两个特性，通过对生物检材中DNA遗传多态性的检验进行个人识别和亲权鉴定。 当前成熟的法医DNA分型，主要是利用对重复序列的分析达到个人识别的。;;关于重复序列;关于短串联重复（STR）序列;不同个体的重复序列存在差异;13个STR位点的联合分析;当前最常用的13个STR位点;关于STR座位（位点）的命名;;3.1 PCR的基本原理 在体外条件下，利用DNA聚合酶的催化作用，以靶DNA作为模板，由一对引物引导DNA合成，使两引物间的靶DNA片段得到特异性的扩增。 其扩增产物的特异性是由引物的序列所决定的。 ;;3.1 PCR的基本原理 在体外条件下，利用DNA聚合酶的催化作用，以靶DNA作为模板，由一对引物引导DNA合成，使两引物间的靶DNA片段得到特异性的扩增。 其扩增产物的特异性是由引物的序列所决定的。 所谓引物(primer)是由DNA合成仪人工合成的与待扩增的DNA片段两翼互补的寡核苷酸片段(由几个或几十个碱基组成)。 ;3.1 PCR的基本原理 在体外条件下，利用DNA聚合酶的催化作用，以靶DNA作为模板，由一对引物引导DNA合成，使两引物间的靶DNA片段得到特异性的扩增。 其扩增产物的特异性是由引物的序列所决定的。 所谓引物(Primer)是由DNA合成仪人工合成的与待扩增的DNA片段两翼互补的寡核苷酸片段(由几个或几十个碱基组成)。 在进行PCR时，DNA的合成只能在两引物之间沿待扩增的DNA模板进行，从而得到两条与模板DNA序列完全互补的DNA新链。; 3.2 PCR的反应过程 将耐热DNA聚合酶（通常使用的是Taq DNA polymerase）、引物、脱氧核糖核苷酸（包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP）、待扩增的模板DNA及提供最佳反应条件的缓冲系统等按照适当的比例混合组成的反应体系装于扩增管中。 通过DNA扩增仪以不同的温度循环进行扩增。; 每个循环周期一般包括三个基本步骤： ①模板DNA变性：即在940—960C高温下使模板DNA发生热变性，打开DNA双链。 ; 每个循环周期一般包括三个基本步骤： ①模板DNA变性：即在940—960C高温下使模板DNA发生热变性，打开DNA双链。 ②退火：降低温度(50-600C)使引物与模板DNA上的互补序列结合。由于反应体系中引物的浓度大大高于模板DNA的浓度，因此退火过程中因竞争作用而使引物与模板DNA上的互补序列杂交结合，而不是模板DNA自身两条单链的重新结合。 ; 每个循环周期一般包括三个基本步骤： ①模板DNA变性：即在940—960C高温下使模板DNA发生热变性，打开DNA双链。 ②退火：降低温度(50-600C)使引物与模板DNA上的互补序列结合。由于反应体系中引物的浓度大大高于模板DNA的浓度，因此退火过程中因竞争作用而使引物与模板DNA上的互补序列杂交结合，而不是模板DNA自身两条单链的重新结合。 ③引物延伸：在700C左右的反应温度下，通过DNA聚合酶的作用，以待扩增的靶DNA片段为模板，将相应的单核苷酸连接到引物的3’末端，使引物的3’末端沿模板DNA延伸，合成与模板DNA完全互补的新DNA链。;; 当一个反应周期结束，靶DNA片段即可增加一倍。 从理论上讲，随反应周期的增加，靶DNA片段呈指数增加。 如经过n个周期的循环，则靶DNA片段可增至2n倍。;;D3S1358 12-20; 聚合酶链式反应(polymera