基于酸性蛋白酶的新型蛋白饲料研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

西南交通大学硕士研究生学位论文 西南交通大学硕士研究生学位论文 第1页 摘要 酸性蛋白酶(Acid protease)是一种适合在酸性条件下水解蛋白质的酶 类，它已被广泛的应用于食品、酿造、皮革、胶原纤维和饲料工业等诸多行 业。而近年来酸性蛋白酶作为一种新型饲料添加剂的应用得到人们的广泛重 视。 本论文以米曲霉菌株和酵母菌CHC一3、DSF—l、GY一1为出发菌株，通过米 曲霉菌株的筛选、生产酸性蛋白酶最佳培养基的优化、酵母菌培养基的优化 以及混合固态发酵工艺的研究，获得一条富含小肽的新型蛋白饲料生产工艺。 并对所产新型蛋白饲料进行仔猪饲喂试验以及对米曲霉所产的酸性蛋白酶进 行分离纯化获取相关酶学信息。 实验以米曲霉A一29和A一79等菌株为出发菌株，进行发酵培养和产酶 菌株的筛选，发现菌株A一29生产酸性蛋白酶能力较强。进一步通过正交实 验方法对A一29菌株酸性蛋白酶生产的培养基组成进行研究，结果表明，米 血霉A一29在豆饼粉7．5％、(NH)：S040．8％、水40％、I(H：POt0．25％、麸皮 51．45％的固体培养基上所产酸性蛋白酶活力最高，发酵温度为30℃，最适发 酵时问为72h。同时通过培养基优化实验发现，获取酵母菌CHC一3、DSF一1、 GY一1最大生物量的最适混合液态发酵培养基为：麸皮5％、玉米糖浆85．2％ (糖度11％)、豆饼粉9％、(NH。)。S040．8％。所用三株酵母菌CHC一3：DSF一1： GY-1以3：4：2的比例接种，总接种量控制在9％，发酵温度为30。C，发酵 时间为24h。进一步以麸皮和豆饼粉为主要底物进行混合固态发酵工艺研究， 结果在30℃条件F混合固态发酵36h，获得了酸性蛋白酶活力1440U／g，酵母 菌数6．29×109个／g，粗蛋白含量70．56％，小肽分解率10．12％，还原糖含 量8％的新型蛋白饲料。饲喂试验表明，仔猪料肉比(平均耗饲料kg／kg 肉)明显低于对照组，经济效益良好。 最后经过硫酸铵盐析、脱盐、DEAE--Sepharose Fast Flow离子交换层析、 Sephacry s一200分子筛层析提取了酸性蛋白酶，并经SDS验证该酶纯 化水平已达电泳纯，分子量约为45Kd。 关键词：米曲霉，酸性蛋白酶，固态发酵，小肽饲料，饲喂试验，蛋门纯化 西南交通大学硕士研究生学位论文 西南交通大学硕士研究生学位论文 第1I页 Abstract The acid protease iS a kind of enzyme that iS SUitable for hydrolysiSing the protein under the acid condition(pH 1～5)．It has already been applled in a lot of industries，such as food，brewing， fur and leather，col lagen fiber and fodder，etc． In thiS study，the pOSSibility and process of USing Aspergillus oryzae and yeast in the fodder were investigated．A new technique for producing acid protease feed containing lots of peptides was got．The acid protease of dspergilius oryzae was purified and some characterization and molecular weight was detected．The result showed it was better for producing the acid protease in Aspergillus oryzae A一29 than Aspergi]lus oryzae A-79 and the suitable temposition of medium was as 51．45％of wheat bran，7．5％of bean cake powder，0．8％of (NHd)2S04，0．25％of KH2POdand 40％water．The high enzyme activity of acid protease was tested to incubated at 30℃for 72 hs．The medium of the yeasts was a mixture containing 5％of wheat bran．9％bean cake powder．0．