利用体细胞核移植技术生产黄牛和水牛同种_异种转基因克隆囊胚.pdfVIP

857 　 第 18 卷 　第 8 期 　2008 年 8 月 学术论文 利用体细胞核移植技术生产黄牛和水牛同种 、 异种转基因克隆囊胚 1 ,2 1 1 1 1 1 韦精卫 　孟凡丽 　韦英明 　杨素芳 　陆凤花 　石德顺 1. 广西大学动物繁殖研究所 , 南宁 530005 ; 2 . 北京大学深圳医院生殖医学科 , 深圳 5 18036 摘要 　　以含 neo 和 GF P 基因双标记的水牛 、黄牛胎儿成纤维细胞进行牛转基因体细胞核移植 , 结果发现 : 阿菲迪霉素可有效将胎儿成纤维细胞同步于 G0/ G1 期 ; 以 GF P 阳性细胞进行核移植 , ( ) 其卵裂率 、囊胚率与对照组间无显著差异 P 0 . 05 , 所构建的重组胚 , 2细胞阶段观察不到 GF P 的表达 , 4细胞以后 GF P 的表达逐渐增强 , 在囊胚的内细胞团和滋养层细胞均可检测到 GF P 的表 达 , 将黄牛同种转基因克隆囊胚进行移植 , 获得 1 例妊娠 ; 黄牛卵母细胞一水牛供核细胞构建异 ( ) 种重组胚囊胚率显著高于黄牛供核细胞一水牛卵母细胞构建的异种重组胚 P 0 . 05 , 并且异种核 移植重组胚中可检测到 GF P 表达 , GF P 可作为异种核移植胚胎来源的一种新标记. 关键词 　　水牛 　黄牛 　绿色荧光蛋白( GFP) 　转基因体细胞 　种间核移植 　　随着 “多莉”羊的诞生 , 体细胞核移植于山 下一步的转基因克隆水牛生产奠定基础. [ 1 ] [2 —4 ] [ 5 ,6 ] [7 ] [ 8 ] 羊 , 牛 , 猪 , 小鼠 和水牛 等动物先后 1 　实验材料与试剂的准备 取得了成功 , 动物体细胞核移植技术效率有了一定 提高 , 这使转基因克隆成为了可能. 各国学者正结 所用试剂除 TCM 199 购 自 Gibco 公司外 , 其余 合转基因技术 , 对多种动物 的转基 因克隆进行尝 均来自 Sigma 公司. 细胞松驰素 B 和离子霉素先溶 ( ) 试 , 并取得了长足进展. 1997 年 Schnieke 获得整 于二甲基亚砜 DM SO 中 , 再用培养液稀释至工作 合人凝血因子 IX 的克隆绵羊[9 ] , 1998 年 Cibelli 成 浓度 , 并使 DM SO 在培养液中最终含量