课件：微生物检验第五章球菌.ppt

（二）标本采集 咽拭子、痰液、脓汁和血液等标本采集后在2h内运送到实验室，立即进行检查和接种。 对B群溶血链球菌的检查，用无菌棉签采集第35周~37周妊娠妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌素(10μg/ml)和萘啶酸(15μg/ml)选择性培养肉汤中孵育18~24h，再作分离培养。 （三）标本直接检查 直接显微镜检查 标本涂片、革兰染色、显微镜检查见链状排列革兰阳性球菌有助于无正常菌群污染标本的诊断 荚膜肿胀试验用于检查肺炎链球菌 直接检测抗原 咽拭标本的A群链球菌和女性生殖道标本的B群链球菌可用抗原检测 荚膜肿胀试验 （四）分离培养与鉴定 用羊血琼脂平板培养初代分离需用5%CO2环境，35~37℃孵育24h。 观察菌落性状：溶血现象及菌落大小。 革兰染色为革兰阳性球菌，链状或短链状排列，触酶试验阴性，6.5%NaCl不生长者可确定为链球菌属细菌。 (1)Lancefield群特异性抗原鉴定：B群为无乳链球菌，F群为米勒链球菌。 (2)PYR试验：化脓性链球菌阳性 (3)杆菌肽敏感试验：化脓性链球菌阳性。 (4)VP试验：挑取平板上孵育过夜菌落置于2ml VP肉汤中，孵育6h后加入VP试剂，摇匀30秒，出现桃红色者为阳性。 （5）CAMP试验 β-溶血链球菌鉴定 链球菌属内的鉴定试验 非β溶血链球菌鉴定 菌 种 optochin敏感试验 胆汁溶菌试验 胆汁七叶苷试验 肺炎链球菌 S + — 草绿色链球菌 R — — 牛链球菌 R — + 抗链球菌溶素O抗体检测 常用于风湿热的辅助诊断。 活动性风湿热患者抗体效价一般超过400单位 。 标本 分离培养 脓汁，血液，咽喉拭子 直接涂片镜检 革兰阳性链球菌 与葡萄球菌菌的鉴别 H2O2阳性 1.肚脐样菌落 2.荚膜肿胀试验 3.胆汁溶菌试验 溶血环 与肺炎链球菌的鉴别 α Lancefeild 、PYR、杆菌肽敏感试验 、CAMP试验 β H2O2阴性 6.5%NaCl不生长者 第三节 肠球菌属 广泛分布在自然界。 常栖居在人、动物的肠道和女性生殖道。 为医院感染的重要病原菌。 一、分类 肠球菌属原归类于链球菌属。 于1984年将其命名为肠球菌属。 至今，经由16SrRNA序列分析和核酸杂交等，证实肠球菌可分为5群19个种。 临床标本分离的肠球菌多属于第2群。 二、临床意义 肠球菌所致感染最多见于泌尿道感染,是重要的医院感染病原菌。 多与泌尿道器械操作、留置导尿、尿路结构异常有关。 腹腔和盆腔创伤时也是常见的感染菌。 肠球菌引起的菌血症常发生于有严重基础疾患的老年人、长期住院接受抗菌药物治疗的免疫功能低下患者。 近年来不断上升的肠球菌感染率和广泛使用抗菌药物出现的耐药性有关。 在临床诊断前应认真评估分离菌的临床意义。 临床标本中分离的80%~90%是粪肠球菌。 屎肠球菌约占5%~10%。 很少分离到肠球菌属的其它种。 肠球菌为革兰阳性球菌、呈单个，成对或短链状排列，琼脂平板上生长的细菌呈球杆状。 液体培养基中呈卵圆形、链状排列。 无芽胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。 1.形态 2.培养特性 兼性厌氧，最适生长温度35℃，10℃和45℃均能生长。 营养要求不高。 所有菌株在含6.5%NaCl肉汤中能生长。 在40%胆汁培养基中能分解七叶苷。 3.生化反应和抗原构造 多数菌种具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR）。 不含细胞色素氧化酶和触酶。 但粪肠球菌培养于含血的培养基中，可合成细胞色素或触酶或两者皆有，因而某些菌株表现为触酶弱阳性。 含链球菌D群抗原。G+C为37~45mol %。 4.抵抗力 对头孢菌素类、林可霉素类和磺胺类抗菌药物耐药。 近年来获得性耐药菌株不断增多，表现为对氨基糖苷类耐药和对万古霉素耐药。对万古霉素的耐药是由van A、van B和van C等基因介导。 （一）检验程序  （二）标本采集 常规方法采集血、尿、创伤标本和其他拭子，标本于1小时内接种完毕。 （三）标本直接检查 涂片染色显微镜检查可见单个、成双或短链排列卵圆形革兰阳性球菌。 （四）分离培养与鉴定 标本接种于含血琼脂平板。 若送检标本中含革兰阴性杆菌可选用选择鉴别培养基，常用的有： 叠氮胆汁七叶苷琼脂，可抑制革兰阴性菌生长，而肠球菌分解七叶苷产生黑色菌落； 哥伦比亚多粘菌素-萘啶酸琼脂(CAN)和苯乙基乙醇琼脂(PEA)。 由于耐万古霉素肠球菌发生率增高，为早期检出耐药菌株，可使用含万古霉素琼脂筛选方法。 鉴定方法 菌属的鉴定。 肠球菌属细菌革兰染色阳性，卵圆形，单个、成双或短链排列。 触酶阴性、胆汁七叶苷和PYR阳性、6.5% NaCl肉汤中能生长，45℃生长。 肠球菌属间的菌种鉴定 根据对甘露醇，山梨醇和精氨酸