毒理学第06章--食物中化学物质的致突变作用及评价.ppt

第六章 致突变作用 根据遗传信息的改变方式，基因突变又可以 分为： ①错义突变：由于一对或几对碱基对的改变而 　使决定某一氨基酸的密码子变为决定另一种 　氨基酸的密码子的基因突变。 ②同义突变：没有引起编码氨基酸错误的基因 突变。 ③无义突变：由于一对或几对碱基对的改变而 　使决定某一氨基酸的密码子变成一个终止密 　码子的基因突变。 非整倍性和多倍体的产生是由于染色体分离异常所至。 1. 非整倍体是由于正常细胞未分裂而产生的。 原因是由于细胞在第一次减数分裂时同源染色体不分 离，或在第二次减数分裂或有丝分裂过程中，姐妹染 色单体不分离而形成。 2.多倍体涉及整个染色体组。在有丝分裂过程中，若 染色体己正常复制，但由于纺锤体受损，染色单体不能分离到子细胞中，这时染色体数目就会加倍， 形成四倍体。减数分裂的异常也可使配子形成二倍 体，若二倍体的配子受精，可形成多倍体的受精卵。 § 6-5 致突变试验 一、观察项目的选择 1. 观察效应终点 遗传学终点：指试验观察到的现象所反映的 各种事件。 分5类：DNA完整性的改变。 DNA重排或交换。 DNA碱基序列改变。（基因突变） 染色体完整性改变。（染色体畸变） 染色体分离改变。（染色体组畸变） 2. 致突变试验项目的组合 遗传毒理学评价程序通常为一组体内、外遗传毒理学 试验。因为： ①化学毒物的种类和结构多种多样，其致突变的机制 不尽相同，作用的靶细胞也不一样。 ②致突变物中仅少数具有直接致突变作用，大多数为 间接致突变作用，即需要在体内代谢活化后，才具 有致突变作用。 ③化学毒物的致突变性有强，也有弱；有的在某一检 测系统中是强致突变物，而在另一系统中可能是弱 的致突变物。 入选原则： ①选择的遗传毒性试验应包括5种类型的遗传学终点。 ②实验指示生物应包括若干进化阶段的物种，既要包括原核生物，又要包括真核生物。 ③体内试验与体外试验配合。 ④应包括生殖细胞和体细胞。 通常，对于一种受试物应当先用原核细胞或体细胞 的体外试验按遗传学终点合理配套进行试验，并对 有阳性结果的遗传学终点验证其在体内的真实性， 再行选用生殖细胞致突变试验进行遗传危害的评价。 二、常用的致突变试验 1．鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验 2．微核试验 3. 染色体畸变分析 姐妹染色单体交换试验（SCE） 果蝇伴性隐性致死试验 显性致死试验 程序外DNA合成试验 单细胞凝胶电泳（SCGE）试验 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验 又称Ames试验，检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌 组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型 (his+)的能力。 标准试验菌株有四种： TA97和TA98：检测移码突变； TA100：检测硷基置换突变； TA102：对醛、过氧化物及DNA交联剂较敏感。 试验方法：点试验(预试验)， 掺入试验(标准试验) 。 ①微核：经致突变物作用后，染色体无着丝点断片或 　因纺锤体受损伤而丢失的整个染色单体在细胞 　分裂的后期仍留在子细胞的胞质内，成为一 　个或几个规则的次核，称为微核。 ②微核试验是观察受试物能否产生微核的试验。 　主要可检出DNA断裂剂和非整倍体诱变剂。 ③方法：啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核 　试验。 剂量分组：1/2LD50、1/4LD50、1/8LD50。同时设阴 性对照和阳性对照组。 三、试验结果的评定 1.在评定阳性或阴性结果之前，应首先检查 实验的质量控制情况。 通过：① 盲法观察； ② 阴性对照和阳性对照的设立； ③资料的统计学分析； ④试验结果的重现性。 四、致突变试验中的一些问题 1.阴性、阳性对照组的设立 ①阴性对照：即未处理对照或溶剂对照。 目的：获得试验的基础数据。 ②阳性对照：是用某种已知能产生阳性反应 　　　　　　的物质作对照。 目的： *通过对阳性物质的试验证明实验方法的可靠； *验证实验者在本实验条件下，完成技术和鉴定致突 变物的能力； *证实经一定时间后，本实验的重复性。 2. 体外试验的活化系统 前致突变物：本身不具致突变性，经哺乳动物代谢 才转化成致突变物的化学物质。 ①哺乳动物细胞介导：使用完整的细胞，特别是大鼠肝原代 细胞，与测试细菌或细胞一起培养。 ②