创新基金申请书之研究方案.docVIP

PAGE 安 徽 农 业 大 学 大学生科技创新基金项目 申 请 书 项目名称： 申 请 者： 所在单位： 联系电话： 申请日期： 安 徽 农 业 大 学 教 务 处 二零一零年印制 简表 项目名称 项目类别 申请金额 经费类别 （①校资助②学院教师资助③自筹） 起止年月 申请者 姓名 性别 出生年月 专业 年级 联系电话 项目组成员 姓名 年龄 专业·年级 项目中的分工 签名 研究内容和意义摘要 主题词 立论（包括项目的研究意义及国内外现状分析） 研究方案（包括主要研究内容、研究方法和技术路线,拟解决的关键问题及预期进展、研究成果等） 1.主要研究内容 1)从茶树基因组文库中获得茶树基因组序列。 2)使用SSRFINDER软件寻找SSR位点，采用primer5.0软件根据SSR的侧翼序列设计特异SSR引物。 3)优化CTAB法，提取适合SSR分析的茶树基因组DNA模板。 4)优化茶树SSR-PCR反应体系和反应条件。 5)筛选多态性SSR引物，获得茶树特异性的SSR标记，构建茶树SSR指纹图谱 6)应用多态性SSR引物对茶树种质资源进行遗传多样性分析。 2.研究方法 根据获得的大量茶树基因组序列，使用SSRFINDER软件寻找茶树基因组中重复序列位点，并获得其侧翼序列。然后使用primer5.0软件根据重复序列位点的侧翼序列来设计特异性引物。优化传统的CTAB法提取高质量的茶树基因组DNA。优化SSR-PCR的反应体系中模板DNA的浓度、引物的浓度、Taq酶的用量和dNTP的浓度以及PCR反应条件中的变性温度和时间、退火的温度和时间、延伸的温度和时间、循环数等条件。筛选出能扩增出清晰明亮的特异性条带，且杂带少的引物。然后经过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染，拍照并统计条带。筛选出多态性高、重现性好、特异性强的SSR引物。然后进行数据统计，使用软件分析这些茶树品种的遗传多样性。 3.拟解决的关键问题 1）SSR分子标记的开发需要消耗巨大的人力、物力和财力，而且多态性高、重复性好的SSR分子标记的引物得率很低。这是在SSR分子标记开发中难以避免的问题。 2）对茶树基因组DNA的提取，SSR-PCR反应体系的优化以及聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染条件的摸索也是实验的重要问题。 4.预期进展 2012年5月—2012年6月 查阅相关材料； 2012年6月—2012年7月 实验相关材料的选定及实验的合理策划安排； 2013年7月—2013年5月完成试验核心内容； 2013年5月—2013年6月 项目总结，撰写研究论文， 准备结题。 5.预期成果 1）软件分析找到茶树基因组2-3重复单元的SSR分子标记位点，并设计茶树基因组SSR特异性引物。通过对SSR-PCR体系的优化筛选出多态性高、重现性好的茶树基因组SSR引物。 2）使用开发出的茶树基因组SSR,对茶树样品进行遗传多样性分析。 3）寻找到一个适合茶树基因组SSR分子标记开发的实验途径。 经费预算 支出科目 金额（元） 计算根据及理由 总 计 五．指导教师意见 签字： 年 月 日 学院意见 负责人签字： （公章） 年 月 日 七．学校意见 （公章） 年 月 日