基因工程二轮2.29.docVIP

PAGE PAGE 1 基因工程 一、考点分析 知识内容 等级要求 1、基因工程的原理及技术 A 2、基因工程的应用 B 3、蛋白质工程 A 【学习方案】 活动一 难点突破 难点1：熟悉基因工程中目的基因获取方法及比较 1、逆（反）转录法： ①模板mRNA的来源：在生物体内，只能在特定细胞的细胞质中获得需要的mRNA，如生长激素mRNA只能在动物的 细胞质中获得，原因是 ②经逆转录形成的目的基因结构是不完整的，缺少基因的哪些结构，这些结构有什么作用？ 2、PCR： 下面是PCR过程示意图： ①PCR的原理是 。图中“酶”的特点是 。 ②引物的设计是PCR的关键之一，引物是一段含有20～30个脱氧核苷酸的单链DNA，引物序列越长，特异性越高，原因是 ，引物中G/C含量一般在50%左右，G/C含量高，引物容易和模板结合，但如果过高，在变性阶段双链DNA不容易 。 ③在一次PCR中需要加入两种引物，原因是 ，加入的两种引物上碱基不能发生互补配对，这是因为 。 ④应用PCR技术主要实现了目的基因的扩增，若n表示扩增次数，N0表示向反应系统中加入的模板DNA数量，N表示扩增获得的DNA总数，试建立扩增次数与DNA总量之间的公式模型 。 难点2、限制性内切酶的选择 一个环状DNA在受到不同的酶切割之后形成大小不同的片段，电泳之后形成的条带见下图，请将各酶切位点在环状DNA中标注出来。 例1、限制酶是一种核酸内切酶，可识别并切割DNA分子上特定的核苷酸序列。下图为四种限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ、Hind Ⅲ和BglⅡ的识别序列和切割位点 切割出来的DNA黏性末端可以互补配对的是 A．BamHⅠ和EcoRⅠ B．BamHⅠ和Hind Ⅲ C．BamHⅠ和BglⅡ D．EcoRⅠ和Hind Ⅲ 例2、下列有关限制性内切酶识别的叙述，不正确的是 A．从反应类型来看，限制性内切酶催化的是一种水解反应 B．限制性内切酶的活性受温度、pH的影响 C．一种限制性内切酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列 D．限制性内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越小 例3、已知正常的β珠蛋白基因(以βA 表示) 经MstⅡ限制酶切割后可得到长度为1.15 kb 和0.2 kb 的两个片段(其中0.2 kb 的片段通常无法检测到)，异常的β珠蛋白基因(以βS 表示)由于突变恰好在MstⅡ限制酶切割点上，因而失去了该酶切位点，经MstⅡ限制酶处理后只能形成一个1.35 kb 的DNA 片段，如图1；现用MstⅡ限制酶对编号为1、2、3 的三份样品进行处理，并进行DNA 电泳（电泳时分子量越小扩散越快），结果如图2，则1、2、3 号样品的基因型分别是(以βA、βS表示相关的基因) 难点3、载体的构建、目的基因的检测与鉴定 例4、下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是 A．需要限制酶和DNA连接酶 B．必须在细胞内进行 C．抗生素抗性基因可作为标记基因 D．启动子位于目的基因的首端 例5、（多选）科学家为了研究抑制基因表达的机制，在基因启动子后插入一段颠倒的转录区序列（如图所示），导致新基因转录形成的mRNA因分子内部形成互补区而失去功能。该操作 A．需要限制性内切酶和DNA连接酶 B．在细胞外实现了人工基因突变 C．干扰了基因表达中的翻译过程 D．转录形成的mRNA分子内部靠A－T、C－G配对形成互补区 例6、用含抗四环素基因的质粒将大肠杆菌改造成工程菌，生产鼠的β－珠蛋白，相关操作不合理的是 A．利用反转录技术获得β－珠蛋白基因 B．用含抗四环素基因的质粒构建基因表达载体 C．用Ca2+处理有四环素抗性的大肠杆菌使其变成感受态 D．用含有四环素的培养基筛选导入重组质粒的工程菌 活动二 热点检测 例6、（2010年江苏生物）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭