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西安大恒制药有限责任公司GMP文件 文件编号：SOP-QC-1001-03 第 PAGE 5 页 共 NUMPAGES 5 页 生产质量管理文件 生产质量管理文件 文件名：waters515高效液相色谱仪操作标准 制定人： 制定日期： 分发份数：1份 审核人： 审核日期： 颁发部门：质量部 批准人： 批准日期： 生效日期： 分发至：质量部 【目的】：制定高效液相色谱仪的操作标准，确保操作人员正确操作。 【范围】：本标准适用于高效液相色谱法进行的检测。 【责任】：高效液相色谱仪的操作人员。 【内容】： 1 组成: 高压输液泵、柱箱、检测器、系统控制器、数据工作站及打印机。 2 使用要求： 2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室高效液相色谱仪检定规程（JJG705-90）”的规定作定期检定，应符合规定。 2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。 2.3 仪器的一般要求及系统适用性试验见“高效液相色谱法检验操作标准”项下规定。 2.4 若需要梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。 2.5 使用前详细参阅各操作说明书。 3 操作方法： 3.1 基本操作说明 3.1.1 将溶剂输半空塑料管置溶剂瓶内液面下，打开电源开关，机器开始作自我检查，注意是否有任何故障讯息出现，屏幕出现在设定“FLOW”的界面上。 3.1.2 以反时钟方向转松“溶剂抽取阀门”，以10ml针筒插入阀门洞口，抽取约20ml，然后在阀门下方放置一小烧杯，准备接废液。 3.1.3 在“FLOW”设定界面上，按一下“EDTT/ENTER”键，数字光标开始闪烁，连续按压“▲▼”键设定流速至8.0ml/min，再按一下“RUN/STOP”键，启动PUMP流速来挤压排除气泡。 3.1.4 约等待30秒钟后，再按一下“RUN/STOP”键，停止PUMP流速，然后再将“溶剂抽取阀门”以顺时针方向转紧。 3.1.5 按上色谱柱，调整FLOW设定，逐步递增流速至所需条件，平衡稳定系统。 3.2准备工作： 3.2.1 流动相的配制：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法项下对溶剂的要求进行检查，应符合要求。水应为新鲜配制的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水；凡规定PH值的流动相应使用精密PH计进行调节。配制好的流动相应通过0.45μm微孔滤膜过滤，使用前脱气。应配制足量的流动相及时待用。 3.2.2 供试液的配制：供试品用规定的溶剂配制成供试液。定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应配制两份。进样前须通过0.45μm微孔滤膜过滤，必要时，样品先经提取净化再行配制，以免污染或干扰色谱系统。 3.2.3 检查上次使用记录及仪器状态，检查仪器的开关、各部件安装、连接是否正确，色谱柱是否适用于本次检测要求，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原存溶剂是否与现用流动相互溶，流动相的PH值与色谱柱是否相适应。 3.3 开机：接通稳压电源，依次打开泵、检测器、柱温箱和系统控制器的电源开关。 3.4 泵的操作： 3.4.1 用流动相冲洗滤器，再将滤器浸入流动相中，启动泵， 3.4.2 打开泵的排放阀，用专用注射器从阀口抽出流动相约20mL,设置高流速（9mL/min）或用冲洗键PURGE进行冲泵排气，观察出口处流动相呈连续液流后，将流速逐步回零或停止(STOP)冲洗，关闭排放阀。 3.4.3 将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片边缘检查柱管连接处应无渗漏。初始平衡时间约需30分钟。如为梯度洗脱，应在程序器上设置梯度状态，用初始比例的流动相对色谱柱进行平衡。 3.5 检测器和积分仪的操作： 3.5.1 选定检测器的光源（氘灯或钨灯），设定检测波长，待稳定后，测试参比和样品光路的信号应符合要求，设置吸收度方式和检测响应时间（一般不大于1秒），设置满刻度吸收值（适用于记录仪）。 3.5.2 设定积分仪的积分方法，初步设定衰减、纸速、记录时间、最小峰面积等参数，或设定记录仪的纸速或衰减。 3.5.3 进行检测器回零操作，检查积分仪的电平（LEVEL）应符合要求；或检查记录仪的笔应处在设定的起始位置，如有变动，可继续回零操作直至符合要求。 3.5.4 记录基线，待平稳后，进行积分仪斜率测试，应符合要求。 3.6 进样操作： 3.6.1 将进样器手柄放在载样位置（LOAD）。 3.6.2 用供试液清洗配套的进样器，再抽取适量，如用定量环（LOOP