海南五指山美花兰根部内生真菌多样性及其促生长作用研究-微生物学专业论文.docxVIP

海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明 海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作 所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发 表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明 确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名：看厕 日期： 沙，f年6月7日 学位论文版权使用授权说明 本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授 权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果， 知识产权归属海南大学。 保密论文在解密后遵守此规定。 ● 论文作者签名：舌厢 导师签名：海邑如‘ 日期： 劢『／年6月7日 日期：咖l＼年I占月7日 ／ 本人已经认真阅读“CALIS高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人 的学位论文提交“CALIS高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中规定 享受相关权益。回童迨塞握童唇澄亘!旦圭生；旦=生；旦三生筮查。 论文作者签名：穗厨 签 i 日期：劢f J年‘月7r日 导日 师期 辄押 q 耋 加阳j L》r、／， 摘 摘 要 兰科(Orchidaceae)植物是可与真菌形成典型共生关系的特殊类群，这种特有的共 生关系对兰花在自然条件下的生存至关重要。内生真菌可促进种子萌发，为兰科植物提 供所需的营养，促进兰科植物的生长发育。因此从内生真菌的角度来研究兰科植物十分 必要。美花兰(Cymbidium insigne)为海南特有物种，是国产稀有大花兰种类，为大花蕙 兰杂交育种的主要原生种之一，是不可多得的兰属杂交育种材料，具有极为重要的保护 和开发利用价值。为进一步加强美花兰保育研究，本研究以海南五指山野生美花兰为材 料，对野生美花兰根部的真菌进行分离，运用传统形态学分析对其进行鉴定；利用r DNA ITS技术对所分离的菌株进行遗传多样性分析，并与形态观察结果结合分析，确定其基 本分类地位；从不同C源、N源及温度试验的角度，了解所得菌株的部分生物学特性； 与文心兰组培苗共生，筛选与美花兰有效共生并能明显促进其生物量增长的优良菌株。 主要研究成果如下： 1．确定了美花兰根部内生真菌分离的最适消毒方法。以海南省五指山野生美花兰 (Cymbidium insigne)作为试验材料，对相似生境不同海拔(1659～1805米)的美花兰植株 根部的内生真菌进行分离。75％酒精表面消毒30 s，O．1％升汞溶液消毒4 min、6 min、8 rain，无菌水冲洗4~5次。不同消毒方法共分离到2l类132株内生真菌，表面消毒4 min 分离的菌株种类和数量最多，为14属55株，表面消毒6 min分离的菌株为12属33株， 表面消毒8 min分离的菌株为13属44株，其中以表面消毒4 min分离的菌株种类和数 量最多。 2．利用r DNA ITS技术对所分离的菌株进行遗传多样性分析，将形态学鉴定结果 与rDNAITS序列分析结果相结合，确定菌株的分类地位。共分离到内生真菌132株， 确定为14属，隶属于半知菌类的Pestalotiopsis 5株，Aspergillus 16株，Penicillium 27 株，Trichoderma 1 3株，Cylindrocarpon 1 6株，Curvularia 4株，Nigrospora 3株； Nodulis≯’orium 1 l株，子囊菌门的Chaetomium 1株，Pezicula 1株，Neonectria 6株， Cryptosporiopsis 6株；担子菌门的Tulasnella 9株；Ascomycete sp．9株。5株菌经诱导未 见产孢，其ITS序列与GeneBank中的序列相似性较低，暂不能确定其分类地位，其中 有些可能是新的属或种。 3．菌株的生物学特性研究。在C源试验中，W3．2和W4．1在以淀粉为C源的培养 基上不长。W2．1、W3-2及W4．1在以葡萄糖为C源时生长较快，W2．2、W5．1在以甘 露醇为C源时生长较快，W2—3和W7-1在以蔗糖为C源时生长较快，W2．5在以果糖为 C源时生长较快，W3．1在以淀粉为C源时生长较快，W2．4、W2．6、W3．3、W3-4、W4．2、 W6．1、W7．3、W6—3、W6-4和W7·2在以为麦芽糖C源时生长较快，W6．5在以果糖为 C源时生长较快，W6—6在以蔗糖和麦芽糖为C源时生长较快。N源试验中，W2．