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贵州白刺花遗传变异研究 贵州白刺花遗传变异研究 20 2015 届贵州大学硕士研究生毕业论文 I I PAGE PAGE IV 目 录 摘要IV AbstractV 1 文献综述 1 1.1 白刺花国内外研究概述 1 1.1.1 分布、分类和细胞学研究 1 1.1.2 形态生物学特性 1 1.1.3 白刺花研究现状 2 药用研究 2 抗逆性研究 3 饲用价值研究 3 1.2 遗传变异研究概述 5 1.2.1 遗传变异的概念 5 1.2.2 遗传变异的研究意义 5 1.2.3 遗传变异的研究方法 5 形态学标记 5 细胞学标记 6 生化标记 7 分子标记 8 1.3 研究目的与意义 11 2 材料与方法 13 2.1 试验材料 13 2.2 试剂及其配制 13 2.3 主要工具及仪器设备 14 2.4 试验方法 15 2.4.1 发芽率 15 2.4.2 形态学测定方法 15 2.4.3 种子贮藏蛋白研究方法 15 种子贮藏蛋白的提取 15 电泳、染色和脱色 16 数据统计与处理 16 2.4.4 ISSR 遗传标记 16 基因组 DNA 提取、纯化和定量 16 ISSR 标记引物筛选 18 ISSR 标记反应体系的建立和优化 18 PCR 扩增产物的检测 19 数据统计与分析 19 3 结果与分析 21 3.1 形态分析 21 3.1.1 形态指标 21 3.1.2 形态变异分析 22 3.1.3 形态聚类分析 25 3.1.4 发芽率 25 3.2 贵州 6 个不同种群白刺花种子贮藏蛋白分析 26 3.2.1 贵州 6 个不同种群白刺花种子贮藏蛋白遗传变异分析 26 遗传多样性分析 26 遗传结构分析 27 聚类分析 28 3.2.2 贵州 6 个不同种群白刺花种子贮藏蛋白指纹图谱分析 29 3.3 ISSR 分子标记结果分析 31 DNA 检验结果 31 ISSR 引物筛选结果 31 3.3.3 反应体系的优化确立 33 3.3.4 ISSR 扩增图谱 34 3.3.5 基于 ISSR 遗传多样性 34 3.3.6 基于 ISSR 的遗传结构分析 35 3.3.7 聚类分析 36 PAGE PAGE III PAGE PAGE IV 4 讨论 38 4.1 形态遗传变异 38 4.2 种子萌发情况 38 4.3 贵州 6 个种群白刺花种子贮藏蛋白遗传多样性 39 4.3.1 电泳结果的稳定性 39 4.3.2 白刺花种群遗传变异水平和遗传结构 39 4.3.3 种子贮藏蛋白聚类分析 40 4.3.4 指纹图谱分析 40 4.4 贵州 6 个种群白刺花 ISSR 分子标记 41 4.4.1 ISSR 分子标记可行性 41 4.4.2 白刺花遗传水平和遗传结构 41 4.5 白刺花遗传水平和遗传结构综合分析 41 4.6 三种标记的比较分析 42 5 结论与展望 45 5.1 结论 45 5.2 展望 46 参考文献 47 致 谢 53 个人简介 54 附 图 55 原创性声明 66 贵州白刺花遗传变异研究 摘要 白刺花(Sophora Viciifolia)为贵州喀斯特当地物种，不仅适应了喀斯特地区的干旱、酷热、 土壤偏酸和土壤瘠薄等条件，还具有营养丰富、枝叶多、适口性好等饲用价值，以及白刺花 根、叶、花和果实的药用价值，可以在改善环境的同时实现较高的经济收益，是非常符合贵 州可持续性发展的优异物种资源。本试验以贵州 6 个不同海拔梯度的白刺花种群（从种群 A 到 F 的海拔依次增大）为材料，从形态学、种子贮藏蛋白以及 ISSR 分子标记三个层面上进 行深入研究，得出以下主要结论： 1．供试材料中采自高海拔的E种群和F种群的各项形态指标（株高、茎粗、单株分枝数、 分枝长）都显著的低于其他4个较低海拔种群；白刺花4个形态指标在各种群间都存在变异， 变异系数最大的是茎粗。 2．贵州6个种群白刺花均存在不同程度的硬实性现象，从A种群到F种群硬实率分别为： 85%、92%、78%、85%、94%、95%，经分析，处于高海拔的种群E和种群F硬实率最高， 显著性高于其他种群；种群C的发芽率、发芽势和发芽指数均高于其他种群，表现出较强的 种子活力。 3．贵州6个种群白刺花种子贮藏蛋白图谱上的谱带数目、位置、宽窄和颜色深浅程度均 存在不同程度上的差异，将6个种群区分开是制作指纹图谱的有效手段。 4．利用种子贮藏蛋白和ISSR两种标记，分析贵州6个不同种群白刺花的遗传多样性结果 表明：白刺花的遗传变异主要存在于种群内，但种群间的遗传分化水平亦较高。