广西猪星状病毒分子流行病学调查及基因型分析-兽医专业论文.docxVIP

广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究 广西大学学位论文原创性和使用授权声明 本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所＼一一 取得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任 何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人 为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的 同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。 本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产 权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即： 学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电 子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编 入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段 保存、汇编学位论文。 本学位论文属于： 口保密，在 年解密后适用授权。 耐不保密。 (请在以上相应方框内打“√) 论文作者签名： 瓤瓤 日期： 阳，r、9 6．扩留 指导教师签名： 日期汐，5．口／．，罗 作者联系电话： |≮]协。两a。 电子邮箱：孑Ddr6 7 7；@彪．朋 万方数据 广西猪星状病毒分子流行病学调查及基因型分析摘要 广西猪星状病毒分子流行病学调查及基因型分析 摘要 星状病毒(Astrovirus，AstV)是一种可感染哺乳动物及鸟类 的人畜共患病病原，与多种动物的腹泻疾病相关。星状病毒具有基因 多型性与变异性，可以发生基因重组，使其具有不俗的适应宿主能力 和跨种间传播能力，其潜在的人畜共患风险需引起我们的关注。本研 究通过RT-PCR方法对猪星状病毒在广西地区的流行情况进行了调 查；并利用RACE方法对部分阳性样品的衣壳蛋白基因(oI江2)进 行扩增，为了解广西猪星状病毒的流行状况和遗传进化规律提供了一 定的科学参考。 本研究针对猪星状病毒部分ORFlb与部分ORF2基因设计两种 不同的引物，通过RT-PCR方法对广西9个地市28个不同猪场的460 份猪粪便样品进行检测，结果显示猪星状病毒猪场阳性率为100％ (29／29)；样品阳性率为64．8％(298／460)；O～30日龄猪群感染率最 高，为78．7％(100／127)。调查结果显示，猪星状病毒在猪群中存在 普遍的感染。对克隆的49株猪星状病毒部分ORFlb(400bp)经进 行遗传进化分析，结果显示猪星状病毒可分为4个基因型(PAstV2， PAstV3，PAstV4，PAstV5)，其中40株属于PAstV2型，同型毒株间核苷 万方数据 酸同源性为74．1％-100％；2株属于PAstV4型，同型毒株间核苷酸同 酸同源性为74．1％-100％；2株属于PAstV4型，同型毒株间核苷酸同 源性为89．6％； 6株属于PAstV5型，同型毒株间核苷酸同源性为 93．7％～loo％；此外还克隆得到PAstV3型1株。克隆得到的12株猪 星状病毒部分ORF2(183bp)均为PAstVl型，核苷酸同源性为86．9％～ 100％。所得的克隆毒株中，以PAstV2型毒株居多，说明相对于其它 基因型的猪星状病毒，PAstV2型在广西地区存在较大规模的流行。 本研究参考克隆所得ORFlb3 7端保守序列，设计上游引物2对， 运用3 RACE．PCR的方法对猪星状病毒的ORF2衣壳蛋白基因进行 部分和全长扩增，得到2株衣壳蛋白基因序列，其中包含：1株PAstV2 型的完整衣壳蛋白基因编码序列，命名为PAstV2．GXBS2，其ORF2 全长为2358bp，编码762个氨基酸；1株PAstV2型部分ORF2序列， 命名为PAstV2．GXNN86，其部分ORF2长度为2025bp，编码675个 氨基酸；基于全长ORF2基因遗传进化分析表明，两株病毒均与 MAstV 32型星状病毒处于同一分支；两个分离株都含有ORFlb与 ORF2连接处的高度保守序列和启动子，以及基因组3 7端的茎环结 构序列．对其衣壳蛋白抗原性预测分析发现，两个分离株推导编码的 氨基酸序列中，存在明显的保守区和变异区，分别为laa～417aa和 420aa--762aa，并在其衣壳蛋白的3 7端和5’端存在2个抗原指数 较高的区域。本研究不仅丰富了猪星状病毒流行病学和生物信息学资 料，并为建立不同型猪星状的检测方法打下了坚实的基础。 关键词：猪星状病毒分子流行病学调查遗传进化分析 万方数据 Molecular Molecular epidemiology and genotype analysis of porcine astro virus in Guangxi AB STRACT Astroviruses，as a kind of zoonotic pa