广西鸡源致病性沙门氏菌流行优势菌株血清型及耐药性的研究-临床兽医学专业论文.docxVIP

广西鸡源致病性沙门氏菌流行优势菌株血清型及耐药性的研究 广西鸡源致病性沙门氏菌流行优势菌株血清型及耐药性的 研究 摘要 沙门氏菌可以引起鸡白痢、鸡伤寒和禽副伤寒，具有垂直传播和 水平传播的特点，是严重危害养鸡业的重要病原菌。广西是养鸡大省， 年饲养量超过10亿羽，掌握当前广西鸡源致病性沙门氏菌的流行优 势菌株及其耐药特点，对鸡沙门氏菌病的防治具有重要的指导意义。 1．鸡源致病性沙门氏菌多重PCR检测方法的建立及应用 根据GenBank中发表的沙门氏菌属特异性毒力基因invA、质粒 毒力基因spvR、鸡宿主特异性毒力基因fliC的序列，利用Primer Express 3．0软件设计合成了3对特异性引物。经过反应条件的优化， 建立了检测鸡源致病性沙门氏菌的多重PCR方法。该方法可以特异 性地扩增携带毒力质粒的致病性鸡沙门氏菌，而与大肠杆菌、多杀性 巴氏杆菌、志贺氏痢疾杆菌及普通变形杆菌均无交叉反应：对沙门氏 菌菌液的检出下限为4．5x102 CFU／mL，对重组质粒标准品的检出下 限为1．67x103拷贝／儿。应用所建立的方法，对采集的310份临床病 料进行检测，结果检出invA基因阳性34份，占10．97％，其中 invA+spvR基因阳性20份，占6．45％；invA+fliC基因阳性2份，占 0．65％；invA+spvR+fliC基因阳性12份，占3．87％。 2．鸡源致病性沙门氏菌的分离鉴定及血清型和药敏性分析 万方数据 采集疑似病鸡的组织病料，对沙门氏菌进行增菌和分离培养，对 采集疑似病鸡的组织病料，对沙门氏菌进行增菌和分离培养，对 分离菌株运用VITEK SyStem ATB Expression法ID 32E肠杆菌鉴定 试剂条进行生化试验鉴定，应用玻片凝集试验进行血清型鉴定，采用 ATB VET药敏试剂条对28种肠杆菌抗菌药物进行药敏性试验。结果， 从310份疑似鸡病料中分离鉴定出34株致病性沙门氏菌；这些分离 菌株中有A群l株、C2群l株、B群14株和D群14株，另有3株 未定型，其中以B群鼠伤寒沙门氏菌和D群鸡白痢沙门氏菌为优势 菌株；34株分离株对大观霉素和安普霉素全部敏感，对氯霉素、卡 那霉素、庆大霉素的耐药率小于10％，对阿莫西林、链霉素、氟甲 喹、恶喹酸、磺胺甲恶唑、四环素和呋喃妥因耐药率介于50％和90％ 之间，而对青霉素、苯唑西林、夫西地酸、利福平和甲硝唑的耐药率 达到100％，并且存在多重耐药现象。 3．鸡源沙门氏菌耐药性与耐药基因和血清群的相关性分析 为研究沙门氏菌分离株耐药表型与耐药基因和血清群之间的关 系，对血清型鉴定为B群和D群的29株鸡源致病性沙门氏菌，采用 ATB VET药敏试剂条法对20种抗菌药物进行敏感性测定，应用PCR 技术对这些抗菌药物1 9种相关耐药基因进行检测。结果，29株沙门 氏菌分离株中，青霉素、苯唑西林的耐药率最高(100％)，耐药率超 过50％的还有磺胺甲恶唑(82．76％)、链霉素(75．86％)、恶喹酸(75．86 ％)、氟甲喹(65．52％)、恩诺沙星(55．17％)、四环素(55．17％)、 阿莫西林(51．72％)，而对大观霉素、庆大霉素、安普霉素、氯霉素、 多粘菌素E没有出现耐药性。所有29个分离株至少对6种抗菌药物 II 万方数据 具有耐药性，以6～7重耐药为主(占51．73％)，最高可达14重耐药 具有耐药性，以6～7重耐药为主(占51．73％)，最高可达14重耐药 (占3．45％)。所检测的19种耐药基因中，共检测到14种耐药基因， 其中b／aTEM检出率最高(100％)，检出率超过40％的还有aadAl(62．07 ％)、Sul2(62．07％)、SuB(51．72％)、tetA(48．28％)、qnrA(44．83 ％)，而b／aPsE、aadA2、tetG、tetM、tetX未能检出。所有29个分离 株至少携带2种耐药基因，以携带4～6种耐药基因为主(占79．31％)， 最多者携带10种耐药基因(占3．45％)。B血清群和D血清群的耐 药表型和耐药基因携带率没有明显的差异。表明，广西鸡源致病性沙 门氏菌耐药性及多重耐药性非常普遍，耐药表型与相关耐药基因检出 率呈正相关，而与血清群之间无明显的相关性。 4．超级细菌6肠NDM-1基因TaqMan．MGB荧光定量PCR检测方法 的建立及应用 为建立快速检测超级细菌编码新德里金属p．内酰胺酶1 (NDM．1)的砚弧D际l基因的方法，针对blaNDM-1及其变异体的基因 序列设计一对特异性引物和一条MGB探针，以构建的含有6‰DM-l 基因片段的重组质粒作为阳性标准品，经过反应条件的优化，成功建 立了检测branD 基因的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。该方法 可以特异性扩增6Z钠DM．