果实特异性启动子E8和桃反义PG基因的克隆及序列分析-作物遗传育种专业论文.docxVIP

嚏门霄农难大学司bb攀位论文摘要 嚏门霄农难大学司bb攀位论文 摘要 桃(Prunuspersica伍．，Batsch】是呼吸跃变型果实，成熟果实采后撮快出现 呼吸高峰，果痰迅速变软，大多数瑟种成熟季节又适逢高温裹湿，果实极易腐烂 ．变质，严重影响其销售与贮运，这是长期制约桃生产的主要问题之～。延长桃贮 藏期常采用的低温冷藏等方法，易造成桃果冷害，结果并不十分理想；采用气调 贮藏虽然可以降低果实的呼吸作用和乙烯的合成速率，延长桃的储运时间，但费 用较高盥效果较差。实践证明，通过改善贮藏的方式方法来调节桃的市场供应时 阂是÷分困难的。透过常规育种的方法虽然有望解决，但由于桃为多年生果树， 选育时间较长和种植资源的限制，很难在短时间有所突破。面利用反义基因技术， 通过封闭桃果实成熟后导致软化的基因的表达，就有可能会有效延迟果实软化的 时间与程度。增加储运效果，大幅度提高桃的经济价值。类似的研究已在“番茄’’、 描甜瓜’’、靠樱桃’’等的种质改良中得到应用。 多聚半乳糖醛酸酶是一种缨胞壁本解酶，其表达具有组织特异性，是在果实 的成熟过程巾合成的，在果实的软化中起重要作用。果实特异启动子(z8启动 子)，是乙烯应答性基因启动子，控制E8基因在果实成熟过程中特异表达。本研 究以番茄品种“毛粉802为试材，克隆了果实特异性E8启动子，以桃果肉为 材料壳隆了反义雕基因，为进一步利用转基因技术选育耐储性硬溶质桃薪种质 的研究提供了重要昀实验基础，其主要研究结果为： 采用高盐低硝值法，分步离心法，SDS法，CTAB法，改良CTAB法提取“毛 粉802”番茄幼苗基因组DNA，其中改良CrAB法提取的DNA效果最好，以此DNA 为模板，用特异性弓f物进行PCR扩增，得到了预期大小的片段，将目的片段回收， 壳隆迸pMDl8-T Simple Vector载体，经PCR及酶切检测具有与冒标片段长度相 符的捶入片段。构建的重组堋D18-E8载体经测序分析曼示，番茄果实特异性E8 启动子序列具有高度保守性，与GenBank上发表的E81．1启动子同源性为99．1％， 成功获得了果实特异性E8启动子基因。 采用Trizol法，改良Trizol法l，改良Trizol法2提取了桃总RNA，其中 改良Trizol法2提取的桃栗岗RNA效果最好，经过反转录PCR，扩增出一条 l lSSbp的目的片段，蕊桃叶片、幼果和果皮提取的RNA通过反转录PCR，均 不能获德扩增出一条118Sbp的目的片段，说明PG基因在这些组织中没有或量 很少。通过TA克隆，把目的片段连接到pGEM．T Vector System克隆载体上，获 得重组子pGEM．PG，通过测序、分析，证明所克隆片段与GenBank上发表的 甘肃农业大学硕士掌位论文PG基因序列同源性为98．57％，成功获得了反义PG基因。 甘肃农业大学硕士掌位论文 PG基因序列同源性为98．57％，成功获得了反义PG基因。 关键词：桃；反义(PG)基因克隆；果实特异性E8启动子克隆 Ⅱ 瑁啸帮：业大掌磺士掌位‘沧炎Summary 瑁啸帮：业大掌磺士掌位‘沧炎 Summary Peach(Prunuspersica口√Batsch．)is tipical respiratory climacteric fruits and attains the maturity appears to breathe the hi醢≯救soon during the post harvest period．Most of fruit ripe in hot and moist season。That leads to softening and rotting of fruit flesh。Therefore，the effective way to solve the difficult problem is to breed varieties that Can endure storage transportation．This is the main problem that restricts production of peach．Low temperature storage is the main method to prolong peach storage，but it easliy brings low temperature injury．So it is not the better way．Thought air control storage Can reduce fruit respiration and ethylene synthetical rate tO prolong storage and trans