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- 2019-07-05 发布于浙江
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专题五 DNA和蛋白质技术
课题一 DNA的粗提取与鉴定
一、提取DNA的溶解性原理包括哪些方面?
1.DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同;DNA不溶于酒精。
①DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点?要使DNA溶解,需要使用什么浓度?要使DNA析出,又需要使用什么浓度?
在0.14mol/L时溶解度最小;较高浓度可使DNA溶解;0.14mol/L可使DNA析出。
②在溶解细胞中的DNA时,人们通常选用2mol/LNaCl溶液;将DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中缓慢注入蒸馏水,以稀释NaCl溶液。酒精是一种常用有机溶剂,但DNA却不能溶于酒精(特别是95%冷却酒精),但细胞中蛋白质可溶于酒精。
2.从理论上分析,预冷的乙醇溶液具有以下优点。
一是抑制核酸水解酶活性,防止DNA降解;
二是降低分子运动,易于形成沉淀析出;
三是低温有利于增加DNA分子柔韧性,减少断裂。
3.采用DNA不溶于酒精的原理,可以达到什么目的?
将DNA和蛋白质进一步分离。
4.提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。利用该原理时,应选用怎样的酶和怎样的温度值?
蛋白酶,因为酶具有专一性,蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。温度值为60~80℃,因为该温度值蛋白质变性沉淀,而DNA不会变性。
补充:DNA的变性是指DNA分子在高温下解螺旋,其温度在80
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