白木香S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆与表达分析Cloningand.PDF

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 18, 53 ( 10): 1743 1752 ·1743 · 木香S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆与表达分析 1 1 1 1 1 1 董先娟 , 冯莹莹 , 刘 晓 , 齐博文 , 闫雅如 , 丁 宁 , 1 2* 1* 吴 云 , 高博闻 , 王晓晖 (1. 北京中医药大学中 学院中药现代研究中心, 北京 100029; 2. 包头医学院 学院, 内蒙古 包头 0 14060) 摘要: S-腺苷甲硫氨酸合成酶 (S-adenosylmethionine synthetase, SAMS) 是植物代谢过程中的一个关键酶, 在植物响应生物与非生物胁迫中发挥着重要作用。本研究根据白木香转录组高通量测序结果结合RACE 、RT-PCR 技术从白木香愈伤组织中首次克隆得到1 个SAMS 基因, 命名为AsSAMS1, 并对其进行生物学信 分析、原核表 达与纯化、组织特异性分析及非生物胁迫和激素诱导表达分析。白木香AsSAMS1 基因的开放阅读框 (ORF) 长 1 183 bp, 编码393 个氨基酸, 其蛋白分子质量是43.13 kDa 。生物学信息分析表明AsSAMS1 蛋白含有3 个SAMS 的特征序列, 系统进化树显示AsSAMS1 蛋白与野大豆 ( Glycine soja ) SAMS 蛋白具有较高的同源性。构建原核 表达载体pET28a-AsSAMS1 并在大肠杆菌BL2 1 (DE3) 菌株中成功表达AsSAMS1 重组蛋白, 利用Ni2+亲和色谱 纯化得到可溶性AsSAMS1 重组蛋白。实时荧光定量PCR 检测结果表明AsSAMS1 基因在茎中表达最高, 叶和茎 尖次之, 在根中表达最低。盐、干旱、低温以及重金属胁迫均能够提高AsSAMS1 的表达量和其产物S-腺苷甲硫 氨酸的含量; 茉莉酸甲酯、水杨酸、脱落酸、赤霉素也能够诱导白木香愈伤组织中AsSAMS1 基因表达。本研究 可以为进一步研究S-腺苷甲硫氨酸合成酶在白木香结香机 和植物防御反应中的作用奠定基础。 关键词: 白木香; S-腺苷甲硫氨酸合成酶; 生物学信 分析; 原核表达; 表达分析 中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 18) 10- 1743-10 Cloning and expression analysis of S-adenosylmethionine synthetase gene from Aqu ilaria sinensis 1 1 1 1 1 1 DONG Xian-j uan , FENG Ying-ying , LIU Xiao , QI Bo-wen , YAN Ya-ru , DING Ning ,