新型蛋氨酸测定方法的建立.PDF

分析检验 食品科学 2004, Vol. 25, No. 12 159 新型蛋氨酸测定方法的建立 孙晓东 王雅琴* (北京化工大学生命科学与技术学院 北京 100029) 摘 要 本文建立了一条快速 简便 精确度高的蛋氨酸测定方法 蛋氨酸与过量氯铵 T反应生成蛋氨酸亚 砜 过量的氯铵 T与NTB发生氧化反应生成DTNB一定范围内剩余的NTB的量与蛋氨酸量成正比 412nm测 定其OD值 同时加入掩蔽剂DEPC可有效消除其他氨基酸尤其是含硫氨基酸的干扰 该方法适用于大量的蛋氨酸 菌种的筛选工作 关键词 蛋氨酸 测定方法 * WANG Ya-qin SUN Xiao-dong Abstract -dithiobis(2- 收稿日期 2003-09-16*通讯作者 作者简介 孙晓东(1979-)女 硕士研究生 研究方向为微生物工程 王雅琴(1956-)女 副教授 研究方向为生物化学与分子生物学 (Pro)较差为0.99810相关性较好 围不应超过 0.1否则会导致氨基酸峰重叠 保留时 为保证分析结果的准确性 本文以同一标准氨基酸 间和出峰顺序发生变化 OPA衍生化反应的pH值大于 样品和同一测试样品各重复6次进样分析 各种氨基酸 8.5而FMOC衍生化反应的pH值必须大于9.0 的保留时间(Rt) 相对峰面积(Ax/AI)及其标准偏差 2.5.2本法衍生化反应2min内完成 18种氨基酸在 (RSD%)列于表4 从表4可看出 保留时间的最大标准 22min内出峰完全且分离良好 溶剂峰(22min之后出峰)不 偏差RSD是天冬氨酸(3.02%)和谷氨酸(2.46%) 其它氨 影响检测 是一种理想的全谱氨基酸分析方法 基酸均小于 1% 效果较满意 在相对峰面积中 最 大标准偏差为脯氨酸Pro(7.82%)其次为赖氨酸Lys 参考文献 (5.90%) 效果较差 这可能与其衍生化反应程度或衍 [1]傅亮,倪冬姣,等.氨基酸高效液相色谱分析[J].仲恺农 生物的稳定性或含量高低有关 业技术学院学报, 1994, 7(2): 77. 2.5回收率试验 [2]刘保冬,王维,等.葡萄酒中游离氨基酸的高效液相色谱 本文采用单点和多点加入法将各种单氨基酸标准液定 法测定[J].分析测试学报, 1997, 16(6): 5-7. 量加入分析试样作回收率试验 实验结果表明 各种氨 [3]朱曙东,赵昇皓.氨基酸的高效液相色谱分析[J].色谱, 基酸的回收率范围为92.21%114.24%结果令人满意 1994, 12(1). [4]陈平,纳鹏君,等.反相高效液相色谱测定敦煌壁画胶结 2.5讨 论 材料中氨基酸[J].分析测试技术与仪器, 2002, 8(2). 2.5.1pH值对分析测试的影响 [5]李建国.荔枝三高栽培技术[M].中国农业大学出版社, 流动相的最佳pH值为7.20.025pH值的变动范 1999. 160 2004, Vol. 25, No. 12 食品科学