猪溶菌酶在大肠杆菌中的表达及其复性-食品与发酵工业.PDF

1—1802／ts．201610004 DOI：10．13995／j．cnki．1 猪溶菌酶在大肠杆菌中的表达及其复性 朱德伟，蔡国林，陆健+ (江南大学工业生物技术教育部重点实验室，粮食发酵工艺与技术国家工程实验室， 生物工程学院，江苏无锡，214122) 摘 要 作为c型溶菌酶的一种，猪溶菌酶(Sus scrofalysozyme，SSL)是猪体内抵抗外源性疾病的一道重要屏 障。鉴于猪在畜牧行业中的重要地位，尤其是在饲用抗生素的使用严重受限的今天，SSL的生产显得尤为迫切。 化学合成得到了SSL的编码基因，通过BamH I和Hindlll双酶切之后与载体pET一28a(+)连接，转化至大肠杆 oC、200 菌BL21(DE3)中诱导表达。在25r／min条件下，利用0．1mmol／L的IPTG诱导8h，离心发酵液获得菌 体。对其进行超声破碎获得重组蛋白包涵体，然后对包涵体进行复性，最终获得了具有生物活性的目的蛋白，并 对其酶学性质以及抗菌活性进行了研究。超声破碎后获得了181．05mg／L的重组蛋白包涵体，对包涵体进行复 032．78 性后，比酶活力可达8 U／mg，其最适温度为35℃，最适pH为6．0，与其理论值基本一致，而其抗菌活性 与标准品溶菌酶的作用效果也比较类似，为其规模化生产与进一步应用奠定了理论基础。 关键词 猪溶菌酶；大肠杆菌；包涵体；复性 随着健康养殖理念的倡导以及人们对食品安全 要求的日益提高，饲用抗生素的使用受到了越来越严 格的限制，寻求安全高效的抗生素替代品已经刻不容 菌表达系统对蛋白质的翻译后修饰能力较差，一般表 缓。作为一种天然盐基碱性蛋白质，溶菌酶被广泛应 达产物以包涵体的形式存在。因此，本研究对得到的 用于食品、医药、生物工程以及饲料等领域…。作为 溶菌酶产品进行了进一步的复性，以获得具有生物活 C型溶菌酶的一种，猪溶菌酶(Sus 性的SSL产品。 scrofalysozyme， SSL)是猪体内抵抗外源性疾病的一道重要屏 1 材料与方法 障旧。1。而鉴于猪在畜牧行业中的重要地位，尤其是 在饲用抗生素的使用严重受限的今天，SSL必然存在 1．1 材料 极为广阔的市场前景。 1．1．1 菌种与质粒 然而由于来源受限，目前SSL应用的报道还不多 克隆宿主E．coliJMl09，由本实验室保藏；克隆载 见。溶菌酶的生产可分为3类：直接从动植物组织器 官提取H。]，转基因动植物生产’6。1以及微生物发 酵¨。10|。天然提取虽然简便易行，但是效率较低，且 不易规模化生产；转基因动植物虽然可以把溶菌酶的 种E．coli(ATCC25922)，Staphylococcus 提取与高附加值产品的生产有机结合，但是后续分离 25923)，Klebsiella 17)， 成本较高，且不能连续化生产；发酵生产不仅可以克 Pseudomonas aeruginosa(ATCC 服原材料限制的缺陷，且能够规模化连续生产，将成 为未来溶菌酶生产的主要方式。 luteus，购自南京建成生物科技有限 限公司；Micrococcus 本研究化学合成了SSL的编码基因，通过BamH公司；Bacillussubtilis(Wild