柑橘果实总蜡和外蜡的提取及测定-Bio-protocol.PDF

/e1010213 DOI:10.21769/BioProtoc.1010213 柑橘果实总蜡和外蜡的提取及测定 Extraction and Determination of Total Wax and Cuticular Wax of Citrus Fruits 汪洋，杨宏斌，王金秋，何义仲，程运江* 园艺植物生物学教育部重点实验室，园艺林学学院，华中农业大学，武汉 *通讯作者邮箱：yjcheng@ 引用格式：汪洋，杨宏斌，王金秋，何义仲，程运江. (2018). 柑橘果实总蜡和外蜡的提取及测定. Bio-101 e1010213. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010213. How to cite: Wang, Y., Yang, H. B., Wang, J. Q., He, Y. Z. and Cheng, Y. J. (2018). Extraction and determination of total wax and cuticular wax of citrus fruits. Bio- 101 e1010213. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010213. (in Chinese) 实验目的：检测柑橘果实表面总蜡及外蜡含量。 关键词：柑橘，果实，蜡质 材料与试剂 1. 毛刷 2. 滤纸 3. 10 ml 离心管 4. 1 ml 注射器 5. 0.22 µm 微孔滤膜 6. 气相质谱上样瓶 7. 柑橘果实 8. 蒸馏水 9. 三氯甲烷 10. 正二十四烷 11. 无水硫酸钠 12. 吡啶 Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 1 /e1010213 DOI:10.21769/BioProtoc.1010213 13. BSTFA: N,O-双 (三甲基硅烷基) 三氟乙酰胺 (N,O-bis(trimethylsilyl) trifluoroace tamid) 14. 正二十四烷内标溶液 (见溶液配方) 仪器设备 1. 游标卡尺 2. 1 L 烧杯 3. 100 ml 蓝盖瓶 4. 分液漏斗 5. -20°C 冰箱 6. 烘箱 7. 氮气吹干仪 8. 玻璃内插管 9. 气相色谱-质谱联用 (Thermo，DSQ Ⅱ) 10. TR-1ms 毛细管柱 11. EI 离子源 实验步骤 1. 选取果面光洁，无破损，大小一致的果实用清水洗净，然后在蒸馏水中润洗3次，晾 干。 2. 果实表面积测定：本方法通过建立果实表面积与横纵径相关模型，以果实横纵径推 算果实表面积。温州蜜柑、椪柑、柠檬、纽荷尔脐橙及沙田柚果实表面积与横纵径 相关模型参见王金秋 (2015) 博士毕业论文。 3. 总蜡提取：在1 L烧杯中加入300 ml三氯甲烷，每个果实浸泡2 min，其中轻微振荡 烧杯。所有果实脱蜡处理两次，将两次含有蜡液的三氯甲烷溶液混合在一起，加入 200 μl(1 μg/μl) 正二十四烷内标。 4. 外蜡提取：阿拉伯胶粉用三氯甲烷去除杂质后，配成浓度为90% (w/v) 的乳浊液， 用毛刷将其均匀地涂在柑橘果实表面，室温放置5 h左右，剥离干燥的阿拉伯树胶。 Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 2 /e1010213 DOI:10.21769/BioProtoc.1010213 以上步骤重复一次，并将将两次获取的阿拉伯胶研磨均匀，取其中16 g粉末，溶解 于25 ml双蒸水中。按照水：三氯甲烷(v/v)1:3加入三氯甲烷，随后加入100 μl(1 μg /μl) 正二十四烷内标，剧烈振荡，直到阿拉伯树胶完全溶解为止；静置一段时间， 待分层后，用分液漏斗取下层三氯甲烷澄清液，并用滤纸过滤。 5