金属离子对皱纹盘鲍组织培养的影响-组培苗.PDF

维普资讯 鲁东大学学报 (自然科学版) LudongUniversityJournal(NaturalScienceEdition) 2006。22(3)：224—227 金属离子对皱纹盘鲍组织培养的影响 孙振兴，李 清 ，张 丽，马运超 ，张 媛 (鲁东大学生命科学学院，山东 烟 台 264O25) 摘要i采用 3因素3水平 (3)的正交设计，以组织块增殖百分率作为评价指标 ，研究了在M199和 RPMI一1640 培养基中分别添加 Ca2，Mg ，Zn2金属离子对鲍的外套膜和上足触手组织培养的影响．结果显示，Ca2+和 Zn2对细胞增殖具有明显的促进作用，M 的作用不明显；对上足触手细胞生长最好的组合为5g／L的Ca2 ， 1g／L的M ，20 L的zn2；对外套膜细胞生长最好的组合为 1g／L的ca2，1g／L的Mg ，60 g／L的 Zn2 ． 关键词 ：皱纹盘鲍 ；外套膜 ；上足触手 ；组织培养 ；金属离子 中图分类号：Q813．1；s917．4 文献标识码 ：A 文章编号：1673—8020(2006)03—0224—04 皱纹盘鲍 (Haliotisdiscushannai)是我国北方 1．1 实验材料 沿海重要的经济贝类之一，近年来鲍 的养殖业发 展迅速，但 由于病毒等引起的疾病严重地影响了 供试动物为人工养殖的皱纹盘鲍 ，2龄 ，壳长 鲍的养殖成活率和经济效益 ．进行鲍的组织和细 4．0—5．0cm．实验前将健康活鲍放人室 内具充气 胞培养研究，旨在建立鲍 的连续性细胞系，以便为 装置的水族箱 内暂养 24h，暂养海水 中添加抗菌 病毒性疾病研究提供宿主细胞，为防治鲍 的疾病 素，以抑制细菌 ． 奠定基础 ．有关鲍 的组织培养研究虽有一些报 1．2 培养基 道Ll，，但至今尚未获得细胞系 ． 在细胞生命过程中必不可少的金属元素被称 基础培养基 M199和 RPMI一1640均为美 国 为生命金属L3J．在生物体内，大多数微量金属离子 GIBCO公司产品，其他试剂为国产分析纯 ．培养基 是酶体系或其他蛋 白质的关键成分，它们常参与 按常规方法配制，经 Nalgene抽滤装置灭菌后使 构成酶的活性 中心，对酶的活性及构象起着稳定 用 ，pH调整为 7．4—7．5．Ca 和 Mg2分别用 Ca． 作用，以利于底物接近 ，并通过酶．金属离子．底物 Cl2和 MgC12配制成 10 100mL的母液 ，zn 用 三者的诱导应变配合 ，抑制或激活酶的活性 ，促进 znS04配制成0．2mg／100mL的母液 ，使用时用微 细胞的代谢和生长繁殖 ，生命金属 的缺乏或过量 量移液器添加至培养基中． 都会对细胞生命活动产生不利的影响．因此 ，研究 生命金属对细胞的生物学效应有着重要的理论和 1．3 实验设计 实践意义 ．在培养基中加入钙和镁有助于体外培 养的对虾肝胰腺细胞贴壁生长 引【，但有关金属离 采用3因素3水平 L。(3)的正交设计 ，三种 子在贝类组织和细胞培养中的作用 ，尚未见报道 ． 金属离子的添加浓度各设 3个水平 ，ca 添加浓 本文研究了在培养基中添加 ca¨，Mg2，zn2三 度 (A)设 1，3，5g／L；Mg 添加浓度 (B)设 1，3，5g／ 种金属离子对鲍的外套膜和上足触手细胞生长的 L；Zn 添加浓度(c)设 20，60，100u,g／L．共9个实 影响，可望为建立鲍的细胞系提供依据 ．