海马NMDA受体对严重烫伤HPA轴兴奋性的影响及其机制研究-生理学专业论文.docxVIP

海马NMDA受体对严重烫伤HPA轴兴奋性 海马NMDA受体对严重烫伤HPA轴兴奋性 的影响及其机制研究 摘 要 f l应激是机体在受到应激原刺激时作出的适应性综合反应。当有害的应 激麝(如严重创伤)作用强烈持久时，机体将出现过度应激，过度应激的 最主要表现之一是下丘脑．垂体-肾上腺轴(HPA轴)异常亢进。 HPA轴的异常亢进可导致机体免疫功能抑制，使感染易于扩散。近期 的诸多研究表明，创伤后的免疫抑制可促进感染的发生，从而诱发系统性 炎性反应综合症(SIRS)、多器官功能障碍综合症(MODS)等。另外， HPA轴的亢进还可能是创伤应激不良综合症、应激性溃疡等的发病原因。 这些都说明，以HPA轴亢进为主要表现之一的过度应激导致机体稳态失 恒，因此，调节HPA轴的兴奋性可适时适度地控制机体的应激反应、维持 机体的稳态、改善机体免疫功能。设法弄清楚HPA轴过度兴奋的原因，并 从此原因着手进行调控，无疑为创伤的救治提供了新的思路， 海马是控制应激时HPA轴兴奋性的主要脑区，因此，海马功能的改变 会影响其神经冲动的传导从而影响HPA轴。海马功能的改变又与NMDA 受体(NR)密切相关，因此，我们设想，严重创伤可能会导致海马NR活 性发生改变，进而引超，HPA轴兴奋性的异常改变。 基于以上设想，，我们以大鼠背部30％TBSA III度烫伤作为严重创伤过 度应激模型，采用Cell．attached膜片钳、放射配基结合法、RT-PCR、原位 杂交、RIA双抗体法、Westem blot、免疫共沉淀+Western blot、海马内微 量注射、高效液相色谱及反义核酸技术，研究了：1)严重烫伤后海马NR 活性的变化特点，2)严重烫伤后海马NR活性的变化对HPA轴的影响， 3)严重烫伤后海马NR活性的变化对HPA轴影响的机制，4)严重烫伤 后海马NR活性增强的机制。主要研究结果及结论如下： V 一、严重烫伤后海马NR活性变化特点／1．严重烫伤后o．5h、lh、2h、4h、8h、24 一、严重烫伤后海马NR活性变化特点 ／1．严重烫伤后o．5h、lh、2h、4h、8h、24 h、48h海马NR的亲和力 显著增加，尤以烫伤后2h最为明显。最大结合量从lh起亦显著增加，说 明严重烫伤后海马NR活性显著增强。 2．通过膜片钳技术，直接观察到烫伤后各时相点海马单个NR通道的 开放概率增加非常显著，尤以烫伤后2h最为明显。开放时间常数在部分烫 伤组织中亦有不同程度的增加，说明烫伤应激导致了NR通道持续激活。／ 这与放射配基结合法检测的NR亲和力及最大结合量的变化相互印证。Y 二、严重烫伤后海马NR的变化对HPA轴的影响 ／1．30％TBSA IlI度烫伤后o．5h，大鼠的血皮质醇浓度即异常升高，烫 伤后1h达高峰，烫伤后2天仍显著高于正常对照组：下丘脑CRH转录水 平的基因表达持续上升，烫伤后2h达高峰。说明严重烫伤导致HPA轴持 续过度亢进。本实验中HPA轴兴奋性的变化趋势与大鼠严重烫伤海马NR 活性的变化趋势基本一致，初步提示严重烫伤后海马NR激活可能是HPA 轴持续兴奋的重要原因。 2．海马内微量注射MK一801 6p．g可明显降低烫伤后下丘脑CRHmRNA 阳性神经元数及血皮质醇浓度，注射MK．801 12l-tg可进一步降低烫伤后下 丘脑CRHmRNA阳性神经元数及血皮质醇浓度，表明HPA轴的兴奋程度 依赖于海马NR通道的激活程度，初步证明严重烫伤时海马NR的激活是 HPA轴亢进的重要原因。 3．海马内微量注射ANRl 10nmol可明显降低烫伤后下丘脑 CRHmRNA阳性神经元数及血皮质醇浓度；注射ANRl 20nmol可进一步 降低烫伤后下丘脑CRHmRNA阳性神经元数及血皮透醇浓度。进一步证明 海马NR介导了严重烫伤HPA轴的持续过度激活。r 三、严重烫伤后海马NR的变化对HPA轴影响的机制 j 1．与单纯烫伤大鼠相比，腹腔注射生理盐水未引起烫伤后血皮质醇浓 度的显著变化，腹腔注射地塞米松使烫伤后的血皮质醇浓度有所降低，下 V 降幅度为8．O％，但并无统计学差异(P0．05)，这表明烫伤大鼠的负反馈 降幅度为8．O％，但并无统计学差异(P0．05)，这表明烫伤大鼠的负反馈 功能受到了损害。 2．烫伤后，海马GRmRNA水平即显著下降，GR蛋白也显著下降， 说明背部严重烫伤可导致海马GR减少，且GR的减少是由于基因表达受 到抑制从而使其合成减少引起的。由于GR的改变将使得GC在海马水平 的负反馈受到影响，因此，严重烫伤后海马GR的表达下降是严重烫伤GC 的负反馈受到抑制的重要原因，从而也是HPA轴持续过度兴奋的重要原 因。 3．烫伤前腹腔注射NR拮抗剂MK801 3mg／kg可以使烫伤后海马GR mRNA水平显著上