海洋双壳贝类的免疫特性及调节-海洋生物学专业论文.docxVIP

中国海洋火学博=L学位论文 中国海洋火学博=L学位论文 摘要 摘 要 贝类养殖业是我国海洋经济的支柱性产业，由于近年来养殖贝类的大规模死 亡现象时有发生，病害日渐严重，已成为贝类养殖业发展的瓶颈问题。贝类的免 疫防御系统在防御疾病中扮演着极重要的角色。因此，研究贝类免疫学，以更好 地了解和解决贝类养殖中的病害问题已经非常迫切。本文就贝类的血细胞分类和 细胞免疫功能，贝类血清凝集素的凝集特性，重金属对贝类免疫活性的影响和免 疫调节剂对扇贝免疫活性的调节作用，以及三倍体扇贝免疫功能进行了系统全面 的研究，以期更好的了解贝类的防御机制，并力图从免疫学角度提高贝类的防御 能力，服务于生产。 由于血细胞在抵御外来病原中起着重要的作用，因此对血细胞的形态、结构 和功能有一个细致的了解对更好的研究免疫防御机制是非常必要的。用流式细胞 仪和细胞化学染色方法对毛蚶和栉孔扇贝的血细胞进行了分类研究，并在光学显 微镜下对血细胞进行观察。毛蚶的血细胞主要有四种组成，其中以红细胞为主， 直径为18．4+0，97叫1；透明细胞为5．63±1．49Ⅲn，核染色深，瑞氏染色胞质内光 镜下未见颗粒；颗粒细胞胞质中含有着色颗粒，瑞氏染液染色后一种为桔红色， 8+1．06um，另一种为兰色，6．3+1．251xm：另外还有极少量血细胞几乎没有细胞质， 细胞大小为5．17±1．69I-tm。栉孔扇贝的血细胞主要有两种组成，分别为透明细胞 和颗粒细胞，其中透明细胞瑞氏吉姆萨染液染色细胞质内几乎没有光学显微镜下 能够观察到的颗粒，核质比大，直径为7 3±O．97岬；颗粒细胞细胞质中有颗粒， 核质比较小，直径为10．24±O 64p．m。 对毛蚶和栉孔扇贝血细胞的体外吞噬作用进行研究，结果表明，毛蚶的血细 胞能够对白色念珠菌进行体外吞噬，并首次发现在贝类中除了颗粒细胞和透明细 胞外，红细胞也能够进行吞噬作用，并在这3种细胞中起主导作用。30。c可以 作为毛蚶血细胞体外吞噬作用的最佳反应条件，吞噬百分率可达到62．11％。利 用鳗弧菌Hbrio anguillirum对毛蚶进行免疫刺激后，毛蚶血细胞的吞噬能力与对 照组相比明显增加。扇贝血细胞也可以在体外吞噬白色念珠菌，光学显微镜下可 中圉海洋九学博上学位论文 中圉海洋九学博上学位论文 摘要 以观察到有些白色念珠菌粘附在血细胞膜外部，有些血细胞膜在白色念珠菌粘附 处已经形成凹陷，有些血细胞正在伸出伪足正在进行吞噬白色念珠菌。本实验中 发现伪足在扇贝的吞噬作用中起着重要的作用。20℃可以作为栉孔扇贝血细胞体 外吞噬作用的适：宣反应条件，温度对比实验中吞噬百分率最高达到38．05％。 利用改进的NBT法检测栉孑L扇贝血细胞活性氧的产生，NBT阴性血细胞呈 浅粉红色，无暗蓝色沉淀颗粒。NBT阳性血细胞有光学显微镜可观察到的暗蓝 色沉淀物Formazan。实验发现，在自然状态下，栉孑L扇贝有能够检测到的活性 氧产生，本实验检测的栉孔扇贝的NBT阳性细胞占血细胞总数的20—35％。 分别对海湾扇贝、虾夷扇贝、栉孔扇贝的三种血细胞胞内酶：碱性磷酸酶 (ALP)、过氧化物酶(POD)、酚氧化酶(PO)进行了免疫细胞化学定位，并对血细 胞酶反应阳性率作了统计。结果表明：三种扇贝血细胞ALP阳性率相差不大， 海湾扇贝为46．6％，虾夷扇贝为42．4％，栉孔扇贝为36．8％；三种扇贝血细胞POD 阳性率相差较大，栉孔扇贝阳性率高达50．2％，海湾扇贝为44J2％，虾夷扇贝仅 为17．2％；三种扇贝血细胞PO孵育反应后，由于海湾扇贝、虾夷扇贝PO反应 活性很低，瑞氏染液复染后，无法区分阴性、阳性细胞。实验中对栉孔扇贝PO 阳性率进行了统计，栉孔扇贝血细胞PO阳性率为39．3％。 凝集素作为贝类体内参与体液免疫的非特异性免疫因子，在免疫防御活动中 发挥着对异体成分进行识别、调理和促吞噬等重要作用。以毛蚶为实验材料，对 其血清中的外源凝集素进行研究。毛蚶血清外源凝集素对人的A、B、O血型血 细胞、鸡fnd,鼠的血细胞均有凝集作用，凝集效价分别为256、256、8、16、64； 同时它还能对白色念珠菌、啤酒酵母、溶藻胶弧菌等微生物细胞具有凝集作用。 毛蚶血清外源凝集素具有一定的pH稳定性和热稳定性。在选用的12种单糖和 寡糖中，L．鼠李糖、L一树胶醛糖、麦芽糖、D一半乳糖、蔗糖对毛蚶血清的凝集活 性有明显的抑制作用。用弧菌对毛蚶进行免疫刺激，其血清对血细胞的凝集效价 明显增加。 溶酶体在贝类的免疫防御中起着重要的作用，在亚细胞水平，溶酶体通常被 作为污染物等毒性物质作用的目标，溶酶体的病理性变化也是检测环境胁迫对海 洋生物影响的指标。本文以栉孔扇贝为材料，以重金属cu”胁迫栉孔扇贝，通 过NRR法来检测重金属离子对扇贝血细胞溶酶体膜的损伤，同时