固定化微环境对红豆杉细胞初生代谢和次生代谢的影响-生物化工专业论文.docxVIP

中文摘要用聚氨酯泡沫为载体固定化红豆杉细胞以构建微环境，通过测定分析细胞 中文摘要 用聚氨酯泡沫为载体固定化红豆杉细胞以构建微环境，通过测定分析细胞 壁表面化学成分、膜脂肪酸组分、活性氧、金属离子和紫杉醇等生化指标，研 究了微环境对红豆杉细胞初生代谢和次生代谢的影响。 运用X光光电子能谱仪对东北红豆杉细胞壁表面化学成分进行了分析。结 果表明固定化载体表面的细胞壁的N／C、N／P和多肽类化合物显著高于固定化细 胞，而碳氢化合物和多糖物质则明显低于固定化细胞。固定化细胞壁表面的K／C、 N／C和N／P呈下降趋势。 采用双水相分离法、气相色谱技术以及外源H202添加等手段，分别考察了膜 脂肪酸组分及活性氧的含量变化和紫杉醇合成的关系。结果发现固定化细胞的 膜亚油酸和亚麻酸含量增多，而硬脂酸含量下降，膜脂肪酸组分趋向不饱和化 和脂肪酸不饱和指数(IuFA)增高，固定化细胞的紫杉醇含量与IUFA变化有较 好的同步性，而与硬脂酸含量呈负相关性。固定化细胞胞内H202及微环境溶液内 H20z和02。’的含量在细胞生长晚期(20天后)显著地增加，添加H202(15|l M和 20 1．1 M)能促进细胞的苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性和紫杉醇生物合成，但对膜 脂过氧化产物(MDA)和膜通透性没有影响。 运用电感耦合等离子发射光谱仪对位于固定化载体不同层面的细胞K+、Ca2+ 和M92+进行了测定，分析了固定化不同层细胞的K+、ca2+和M92+含量分布和紫杉醇 合成之间的关系。结果得出固定化内层细胞的离子含量变化规律为：ca”M92+K+， 中层和外层细胞的离子含量变化规律为：l【+ca2+M92+。固定化内层细胞的c矿 和M92+含量显著地高于中层和外层细胞，而K+含量则明显低于中层和外层细胞， 而且内层细胞的紫杉醇含量也显著高于中层和外层细胞。 关键词：固定化，微环境，东北红豆杉细胞，南方红豆杉细胞，紫杉醇，初生代 谢，次生代谢 ABSTRACTThe ABSTRACT The surface chemical composition on the cell wall。cell growth,fatty acid composition of lipid,reactive oxygen species，metal ions and taxol production of Taxus印．cells immobilized 011 polyurethane foam WffIC investigated,SO the primary metabolism and secondary metabolism were studied in the immobilization microenvironment． The surfac宅chemical composition on the cell wall was analyzed by X-ray photoelectron spectroscopy(xPs)．the ratios of N／C．N／P and the weight percentage of peptides on the Wan 8urfac宅of cells immobilized the foam surface were significantly higher but the wcight perconmges of hydroS-like substance and polysaccharidcs Were 0bvio璐ly less than those of the wall 8呢lrfaco of the cells immobilized inside the fo锄．The ratios of l￡／C，N／C and N伊on也e wall stlrfacc of the immobilized cells decreased． 11relationships between membrane fatty acid composition percentage and reactive oxygen speci懿content and taxol production were investigated by the USe of the two-phase separation，gas phase chromatography and H202 addition,respectively． Thc contents of 1inoleic acid and linolenie acid increased but血e content of stearie acid decreased in t