诱导多能干细胞培养试剂盒说明书-深圳市永生原代细胞生物科技有限.PDFVIP

诱导多能干细胞培养试剂盒说明书 产品编号 IMT-K4 产品品牌 IMMORTECH 产品简介 诱导多能干细胞培养试剂盒主要用于诱导多能干细胞（inducedpluripotent stem cell，iPS） 的培养，包含诱导多能干细胞基础培养基 （Cat.No.iPSCBM001-1）和F 细胞 （Cat.No.IMT2001-1） 两个组份。诱导多能干细胞基础培养基是即用型培养基，包含iPS细胞生长所需的多种生长因子， 以及必需的氨基酸、维生素、糖类、无机离子、微量元素等成分。 产品规格 货号 规格 IMT-K4-5 100mL 诱导多能干细胞基础培养基+ 5支F 细胞 IMT-K4-10 100mL 诱导多能干细胞基础培养基+ 10支F 细胞 产品用途 本产品只适用于实验研究，不适用于诊断和治疗。 运输条件 干冰运输 储存条件 诱导多能干细胞基础培养基 （2-8 ℃避光）; F 细胞 （液氮） 使用方法 本方法以T25cm²透气细胞培养瓶为例说明，如为其它规格的细胞培养器皿，请相应的增加或减少细 胞培养基、胰酶等用量。 F 细胞复苏： （1）复苏冻存的F 细胞，37℃水浴速溶，转移入含有9mL PBS 缓冲液 （不含钙镁离子）的15mL 离心管中，低速离心 （1000rpm，室温）4min。 （2）吸弃上清液，将细胞重悬于4mL 诱导多能干细胞基础培养基 （iPSCBM）中形成单细胞悬液， 转移到T25 中，轻轻晃动细胞培养瓶，使F 细胞均匀铺在培养瓶中，置于培养箱 （37℃，5%CO ） 2 贴壁5 小时以上或过夜，确保F 细胞贴壁量达70%T25细胞培养瓶以上。 （★ 若F 细胞贴壁量不足70%T25cm²细胞培养瓶，需按缺少的量补加新复苏的F 细胞，使F 细胞 贴壁量达70%T25cm²细胞培养瓶以上，再进行后续实验操作。） （3）去除含有漂浮F 细胞的培养基，更换新鲜iPSCBM。 诱导多能干细胞培养： （4）将诱导多能干细胞重悬于1mL iPSCBM 中，转移至已接种F 细胞的培养瓶，置于培养箱（37℃， 深圳市永生原代细胞生物科技股份有限公司 深圳市南山区粤海街道粤兴二道6 号武汉大学深圳产学研大楼B602 室 电话： ； 0755 400-9922798 5%CO ）培养。 2 （5）诱导多能干细胞贴壁24h 后，若有漂浮细胞，需换液 （在培养过程建议隔2 天更换新鲜的 iPSCBM）。更换新鲜培养基时，动作轻柔，防止F 细胞脱落飘起。 （6） 根据诱导多能干细胞的状态及时更换F 细胞，建议2-4 天更换F 细胞。更换F 细胞时，小心 吸去培养基，4mL PBS缓冲液润洗细胞2 次，加入0.6mL 0.02%EDTA，轻轻晃动细胞培养瓶，使 EDTA 铺满整个细胞层后，轻轻拍打细胞培养瓶使F 细胞脱落，同时谨防诱导多能干细胞脱落。 （7） 去除脱落的F 细胞后，用4mL PBS缓冲液轻轻润洗诱导多能干细胞3 次。 （8） 若诱导多能干细胞不需传代，则直接加入新复苏的F 细胞悬液 （方法如第 1、2 步），继续共 培养。 （9）若诱导多能干细胞融合度达80%，则需传代。去除F 细胞后 （接步骤6），加入0.6mL 0.05% 胰酶-EDTA。轻轻晃动细胞培养瓶，使消化液铺满整个细胞层后，置于37℃孵育2-7min （视细胞贴 壁能力而定）。当90%诱导多能干细胞从培养瓶脱落后，加入 1mL 终止液 （含 10%血清的PBS缓 冲液）终止。 （10） 收集细胞悬液全部转移至15mL 离心管中，加入4mLPBS缓冲液清洗培养瓶2 次，将所有 液体转移至同一15mL 离心管，离心4min （1000rpm，室温）。 （11）吸弃上清液，用iPSCBM 重悬诱导多能干细胞并转移入新的细胞培养瓶中 （建议传代比例1 ︰2-1 ︰4），培养基体积补至6mL 继续培养。 （12）若诱导多能干细胞需要冻存，则离心、吸弃上清液后，加入冻存液 （90%血清+10%DMSO） 重