等位基因特异性实时荧光PCR技术进行α0.doc

等位基因特异性实时荧光PCR技术进行α0-地中海贫血的排除性无创产前诊断 刘彦慧1,吴亚敏2, 石少权3,娄季武1, 马秋林1, 何怡1, 徐婉芳1, 林洋洋1 ,周万军4* 1东莞市妇幼保健院产前诊断中心,广东 东莞 523700；2 东莞东华医院中心实验室, 广东 东莞523220；3 中山大学第五附属医院妇产科, 广东 珠海519000；4 南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室, 广东 广州 510515 * 通信作者: Email: HYPERLINK mailto:zhouwanjun72@163.com zhouwanjun72@163.com 【摘要】 目的 建立并评价一种能实现纯合α0-地中海贫血排除性无创产前诊断的等位基因特异性实时荧光PCR技术(AS-QPCR)。方法 收集--SEA基因缺失高风险孕妇及配偶外周静脉血，采用PCR微测序技术检测缺失断裂区内所筛选的9个SNP以确定双亲差异位点；利用GAPDH结合SRY基因标准曲线法定量分析血浆游离胎儿DNA(ffDNA)及母体血浆总DNA；通过AS-QPCR技术检测ffDNA中的双亲差异SNP位点，根据父源性SNP位点判断父方是否将缺失单倍型遗传给胎儿，而实现排除性无创产前诊断。结果 167个家系的孕妇血浆DNA平均浓度为501.62±398.68基因组当量/ml，其中87个男胎孕妇血浆DNA平均浓度为69.