连接酶反应技术检测冠心病三个相关基因的单核苷酸多态性.pdf

塞旦捡坠医烦盘查2Q!!生12旦筮3鲞笠垒期g丛!!璺星』!!盟81Q￡g!ini!!!￡巫hQ!!碰!!，旦!￡i堡b里2Q!!，y!!．!。№墨·215· 连接酶反应技术检测冠心病三个相关基因的 单核苷酸多态性 缪应新 甘洁民 施泓 陈洁 周晓倩 赵虎 作者单位：200040上海市。复旦大学附属华东医院检验科 chain detectionreac— 【摘要】目的利用聚合酶链反应一连接酶反应(polymorphismreaction—ligase nucleotide 护骨素基因T950C、G1181C六个多态性位点的单核苷酸多态性(single polymorphism，SNP)。 方法参照待测多态性位点所在DNA序列设计并合成一对引物及3条探针，先通过PCR反应获得含 有待检测突变位点的基因片段，再进行LDR，根据测序电泳结果所显示的含荧光标记的LDR产物的片 段长度来判断基因型别。结果采用PCR技术成功扩增出包含瘦素受体基因(110bp，130bp)、脂联素 基因(400 bp)、护骨素基因(118bp，163bp)多态性位点的基因片段。根据LDR产物片段长度不同进行 基因分型，纯合子只有一种片段长度，杂合子包含两种纯合子的片段长度，如瘦素受体基因SNP Lysl09Arg(A／G)的PCR产物长度为110bp，LDR产物片段的长度为110bp时则判断为AA基因型， 112 bp两种片段长度。PCR—LDR基因分型结果 bp则判断为GG基因型．AG基因型则具有110bp、112 与DNA测序技术的检测结果一致(Kappa=1，＆0．00)。结论PCR—LDR技术简单、快速、准确、成本低， 适用于大批量SNP检测。 【关键词】聚合酶链反应；连接酶反应；单核苷酸多态性；瘦素受体基因；脂联素基因；护骨素基因 detection The reactionfor ofthree correlated ligase detectingsingle-nucleotide gene polymorphism with heartdisease coronary MIAO ofClinical Ying—xin，GANJie—min，SHIHong，et Laboratory，Hua a1．Department DongHospital，Fudan 200040，China University，Shanghai To amethodbasedonthe chain detec— 【Abstract】Objective develop polymorphasereaction-ligase tion detectionof reaction(PCR-LDR)forsingle-nucleotidepolymorphism(SNP)ofleptinreceptorgene and 181C．Methods G276T，T45G T950C，G1 Lysl09Arg，Gln223Arg，adiponectingene osteoprotegeringene Primersand were to DNA LDRtestwas aft