桂苓消异方对子宫内膜异位症在位内膜基质细胞作用机理的研究-中西医结合临床专业论文.docxVIP

扬州大学硕士学位论文脾以温肾阳、血竭粉以增强祛瘀散结的力量，组成桂苓消异方，用于临床取得了 扬州大学硕士学位论文 脾以温肾阳、血竭粉以增强祛瘀散结的力量，组成桂苓消异方，用于临床取得了 较好疗效。本课题用桂苓消异方进行子宫内膜异位症的体外实验研究，为桂苓消 异方的临床用药提供理论依据。 二、初步建立人子宫内膜基质细胞的体外纯化培养方法 收集2008年lO月至2009年4月在扬州市第一人民医院和中医院妇产科接受 手术治疗子宫内膜异位症或子宫肌瘤的患者的在位子宫内膜，分离培养基质细胞 并传代，利用显微镜观察细胞生长增殖情况，免疫组化法鉴定细胞纯度。 结果显示，结合采用酶消化法、筛网分离法、离心分离法及差时贴壁法，成 功分离培养出人子宫内膜基质细胞，成功率为88．89％。细胞可传代4．5代，成活 4．5周。证实在本实验条件下，体外分离纯化的子宫内膜基质细胞具备良好的增殖 能力。内异症与非内异症子宫内膜均可分离培养成功(PO．05)。内膜基质细胞的 取材时期对细胞成活率以及增殖能力有影响(P0．05)。子宫内膜基质细胞的成功 分离培养为揭示子宫内膜异位症的发病机制以及药效学研究建立了良好的实验平 厶 口。 三、桂苓消异方对子宫内膜基质细胞分泌MMP．9的影响及IL--6、IL-8 与子宫内膜基质细胞分泌MMP-9的相关性研究 制各桂苓消异方含药血清，用其干预人子宫内膜基质细胞，倒置显微镜下观察 细胞的形态变化，并收集24h、48h、72h三个时问段的细胞培养上清液，用酶联 免疫吸附试验法(ELISA)定量检测其分泌的MMP．9。 配置含不同浓度IL．6、IL．8的培养液，用其培养人子宫内膜基质细胞，倒置显 微镜下观察细胞的形态变化，并收集24h时间段的细胞培养上清液，用酶联免疫 吸附试验法(ELISA)定量检测其分泌的MMP。9。 通过定量检测，证明了桂苓消异方药物血清能够降低子宫内膜基质细胞分泌 MMP一9(P0．01)，并随着其浓度的增高和作用时间的延长而抑制作用越明显；IL-6 能刺激子宫内膜基质细胞分泌MMP．9(PO．01)，且呈浓度依赖性。这提示IL-6 与子宫内膜基质细胞分泌MMP．9存在相关性，桂苓消异方既可直接抑制子宫内膜 基质细胞分泌MMP．9，又可通过抑fl列IL．6的分泌进而间接抑制MMP．9的分泌，从 基质细胞分泌MMP．9，又可通过抑fl列IL．6的分泌进而间接抑制MMP．9的分泌，从 而控制子宫内膜异位的发生发展。本实验显示IL．8对子宫内膜基质细胞产生 MMP．9无显著影响(P0．05)，提示IL．8对子宫内膜的影响不是通过提高MMP．9 水平而促进异位内膜种植的。 关键词：子宫内膜异位症基质细胞体外培养药物血清MMP．9 IL．6 IL．8 课题来源：省科技厅应用基础研究项目 桂苓消异方治疗子宫内膜异位症作用位点及效应的研究 项目编号：K0007186 ●_。I_____●____-。-_●_●-__--●________■-●_I●___-_______●_●_-_____●__-。。_-_-_●●_。---__-。。。●-’。。●’———1’__-’。。’1_—’’-’—一一一一一 ●_。I_____●____-。-_●_●-__--●________■-●_I●___-_______●_●_-_____●__-。。_-_-_●●_。---__-。。。●-’。。●’———1’__-’。。’1_—’’-’—一一一一一．塑型奎兰堡主兰垡堡茎4一 The experimental study on the mechanism of Guiling xiaoyi decoction Oil eutopic stromal—cell in endometriosis ABSTRACT Endometriosis is a common and frequenhy-occurring gynecological disease which defined as endometriotic tissues growing outside the normal uterine cavity．Endometriosis often causes dysmenorrhea,dyspareunia and infertility．The incidence has shorted豳崦trend in recerA years．Endometriosis is not only wide range of lesions，morphological diversity,but also has malignant biological characteristics， such as transfer,inf