副溶血弧菌O抗原基因簇中庚糖基转移酶Ⅱ基因缺失株的-微生物学报.PDF

微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 2016, 56(2): 291-300 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxb Research Paper 研究报告 副溶血弧菌O抗原基因簇中庚糖基转移酶Ⅱ基因缺失株的构建 及其功能 1 1, 2 1 * 赵峰 ，孟松松 ，周德庆 1 中国水产科学研究院黄海水产研究所，山东 青岛 266071 2 上海海洋大学食品学院，上海 201306 摘要： 【目的】构建副溶血弧菌庚糖基转移酶Ⅱ基因(waaF) 的缺失株，探究waaF基因在副溶血弧菌O抗 原合成中的作用。【方法】本研究以副溶血弧菌临床分离株为研究对象，利用甲壳素介导的转化技术构 建临床分离株的waaF基因缺失株；分别对野生株、缺失株的生长曲线、菌体形态和血清型进行了测定； 利用大肠杆菌S17λpir菌株与副溶血弧菌结合转移的方法，分别构建O3 、O5和O10来源的waaF基因的回 补株，通过血清型测定，验证同源waaF基因的功能。【结果】成功构建了waaF基因缺失株，基因缺失 株生长正常，其生长曲线、菌体形态同野生菌株基本一致，基因缺失株同O抗血清不发生凝集反应， O抗原特性消失。回补实验显示，O3和O5来源waaF基因的回补株能恢复原有O抗原特性，O10来源 waaF基因的回补株则不能恢复基因缺失株的O抗原特性。【结论】waaF基因同O抗原的合成相关，是 O抗原合成的关键基因，不同O抗原副溶血弧菌中waaF基因功能存在差异。 关键词：副溶血弧菌, O抗原, waaF基因, 功能分析 副溶血弧菌( Vibrio parahaemolyticus)是一种 中在少数几个血清型(O3:K6、O4:K68和O1:KUT等) 革兰氏阴性嗜盐菌，属于弧菌属，广泛分布于海 中，这几种血清型构成了副溶血弧菌的主要流行 [1] 洋和河口环境中 。人们通常由于食用了生的或 群，其中O3:K6型在致病性副溶血弧菌中占80%左 [4–6] 者加热不彻底的海产品感染副溶血弧菌，进而引 右，该流行群具有非常高的感染和传播能力 。 起肠胃炎，典型的临床现象多为急性痢疾和腹部 Chen等的研究显示，上述流行群可能是由同一祖 疼痛，伴有腹泻、恶心、呕吐、发低烧、发冷、 先，通过抗原基因簇及其邻近序列的重组进化而 [2–3] 和水样大便 。自1996年以来，在全球范围内引 来，但副溶血弧菌的血清型多样性的遗传基础以 [7] 起食物中毒事件爆发的致病性副溶血弧菌主要集 及血清型同致病性之间的关系等尚不明确 。 基金项目：国家自然科学基金(3120