2016.4.25卫生职称--临床医学检验技术中级(考点串讲4).pptVIP

　 1.糖（醇、苷）类发酵试验：各种细菌分解糖（醇、苷）的能力不同，分解后代谢产物不同，可根据其分解产物鉴别细菌。实际应用中，可选择合适的含有单糖、双糖、三糖或多糖的培养基，接种待检菌，经培养后观察结果。若能分解糖类产酸，培养基中的指示剂呈酸性反应；产气的细菌则出现气泡或裂隙。如大肠杆菌能分解乳糖，伤寒杆菌与痢疾杆菌则不能，用此可加以区别。糖发酵试验是鉴定细菌最常用的生化反应，特别用于肠杆菌科细菌的鉴定。 2.甲基红试验：细菌分解葡萄糖形成丙酮酸，丙酮酸进一步分解成甲酸、乙酸、乳酸等混合酸，使培养基pH下降至4.4以下，加入甲基红指示剂变为红色。若产酸量少或将酸进一步分解为醇、酮、醛等，使培养基pH在5.4以上，甲基红试验则呈橘黄色。该试验简称为MR试验。将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基内，培养后滴加甲基红试剂，呈红色为MR试验阳性，橘红色为弱阳性，橘黄色为阴性。该试验主要用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。 3.VP试验：有些细菌能使丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，进而在碱性溶液中被空气中的氧氧化成双乙酰，双乙酰在α-萘酚和肌酸的催化下，生成红色化合物，为VP试验阳性。将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，培养后按每毫升培养基加入含0.3%肌酸或肌酐的0.1ml40%KOH溶液，48～50℃水浴2h或37℃4h，充分摇动后观察结果，红色为VP试验阳性。 4.吲哚试验：有些细菌含有色氨酸酶，分解培养基中的色氨酸产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。该试验也称靛基质试验。将待检菌接种于蛋白胨水培养基中，培养后沿管壁加入对二甲基氨基苯甲醛试剂0.5ml，使其形成两层液面，两液面接触处呈红色为阳性，无色为阴性。该试验主要用于肠道杆菌的鉴定。 5.硫化氢试验：有些细菌分解含硫氨基酸生成硫化氢，遇培养基中的醋酸铅或硫酸亚铁可形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀。将待检菌接种于醋酸铅培养基中培养，有黑色沉淀者为阳性，无变化者为阴性。H2S试验常用于肠杆菌科菌属间的鉴定。 细菌鉴定程序： 致病细菌的检验程序： 主要有涂片镜检、分离培养、生化试验、血清学试验等。 1、涂片镜检：鉴别在形态学上和染色性上具有特征的致病菌。 2、分离培养：以获复纯培养后进一步鉴定。 3、生化试验：依据不同致病菌具不同的酶系催化其代谢活动，通过鉴定酶系来达到细菌鉴定的目的。 4、血清学试验：采用已知特异抗体的免疫血清与分离培养出的未知纯种细菌进行血清学试验来鉴定细菌。 抗菌药物的敏感性试验　 纸片法药敏是将含有一定量抗菌药物的纸片，置于表面涂有细菌的琼脂培养基平板上，过夜培养后，抗菌药物就会向外渗透，抑制平板上细菌的生长，在纸片周围显示出抑菌圈。抑菌圈越大，说明该致病菌对药就越敏感。 通常可根据抑菌圈的大小将病原菌分为敏感、中度敏感、耐药。如果致病菌对某种抗菌药呈耐药，一般来说，临床上不选用该抗菌药，这是基于正常剂量给药后，血液中的药物浓度难以达到杀灭该病原菌的水平。 但药物在感染部位如能达到较高的浓度，在临床选择抗菌药物时也应加以考虑。如尿路感染，即使纸片法药敏试验时病原菌对某抗菌药物耐药，如果该抗菌药物主要以原形从尿中排出，其在尿液中所能达到的药物浓度仍具有杀灭该病原菌的作用，临床可予选用。 稀释分离法-微生物 通过不断稀释使被分离的样品分散到最低限度，然后吸取一定量注入平板与温度适合溶化了的琼脂培养基混合，这样分散的细菌被固定在原处而形成单菌落。 　　（1）将大肠杆菌或酵母菌用无菌水制作菌悬液。 　　（2）取若干支无菌试管，每支内盛9ml无菌水。 　　（3）吸取1ml制备好的菌悬液，置于第一支含有9ml无菌水的试管内，这样就稀释了10倍，也就是10-2。 　　（4）从第一支试管内（10-2）吸取1ml注入第二支含有无菌水的试管内，这样就稀释了100倍，也就是10-2。 （5）用同样方法操作，直至稀释至10-5-10-6　　 （6）分别精确吸取10-5-10-6各稀释度菌液0.2ml加入编好号的空无菌平皿中，同一稀释度重复做三个平皿。 　　（7）将已溶化并冷却至45℃的琼脂培养基倒入上述各平皿内，轻轻旋转使培养基与菌悬液充分混匀，凝固后倒置于37℃或38℃度恒温箱中培养24-48小时，观察平板上菌落生长和分布情况。 葡萄球菌属 （1）形态、染色和分类为革兰染色阳性球菌，无鞭毛，无芽胞，不形成荚膜。根据色素及生化反应等不同，葡萄球菌可分为金黄色葡萄球菌（金葡菌）、表皮（白色）葡萄球菌和腐生（柠檬色）葡萄球菌三种。金葡菌为凝固酶阳性菌，表皮、腐生葡萄球菌为凝固酶阴性菌，其中金葡菌多为致病菌。 致病物质的种类： ①凝固酶：能否产生此酶作为鉴定菌株有无致病性的