缺氧对体外培养髓核细胞骨钙素水平的影响-上海师范大学学报.PDF

第 卷第 期 上海师范大学学报 自然科学版 年 月 缺氧对体外培养髓核细胞骨钙素水平的影响 吴源 徐源俊 王善金 谭 军 同济大学东方医院上海 摘要 研究了缺氧对体外培养髓核细胞骨钙素表达的影响及意义将人髓核细胞株进行体 外培养在显微镜下观察髓核细胞的生长形态在传代培养 时分别收集 组细胞 采用免疫组织化学法检测骨钙素的表达应用图像分析系统进行了半定量检测光密度 值显示体外培养髓核细胞在 时缺氧组髓核细胞表达水平均明显高于常氧组 平均光密度值分别为 均 且缺氧组髓核细胞骨钙素表达水平随缺氧时间延长而逐渐升高常氧组各时间段之间 髓核细胞骨钙素表达水平无统计学差异缺氧可诱导髓核细胞骨钙素的表达上调缺氧环境下 髓核细胞的骨钙素过表达缺氧可能对椎间盘软骨终板矿化起到促进作用 关键词 髓核细胞 骨钙素 缺氧 免疫组化 中图分类号 文献标志码 文章编号 椎间盘由髓核纤维环和软骨终板 部分组成是人体中最大的无血管组织四岁时椎间盘就几乎 没有任何血管间盘营养严重减少髓核细胞群随之发生明显变化脊索细胞被更多的能适应无氧环境 的软骨细胞和纤维母细胞所代替十岁时颈椎间盘已经成为一个无血管的组织其营养供应主要来自于 软骨终板的渗透软骨终板中央部分渗透性较周围部分高软骨终板中央部分有 区域可以渗透而 周围部分仅约 区域可以渗透软骨终板在髓核处溶质渗透占整个软骨终板的 在软骨终板接 近内呈纤维环处下降到 在软骨终板接近外层纤维环界面处几乎完全不能渗透椎间盘营养通路 主要有终板途径和纤维环途径椎体内的血管不断分支在软骨终板下骨质形成血管袢包括氧气在内 的绝大部分营养物质通过这些血管袢经扩散作用透过软骨终板椎间盘基质最终到达内部的椎间盘细 胞而乳酸等代谢废物经过相反途径排出此即终板途径 等通过动态增强清楚观察到这一现 象 小部分营养物质通过分布到最外层纤维环的血管末梢来提供养分即纤维环途径 但随着机 体的老化供应椎间盘周围的血管数量减少软骨终板逐渐钙化氧气等营养物质的供应及代谢废物的 排除受到阻滞椎间盘内逐渐形成缺氧微环境这种微环境对椎间盘退变的发生发展如何产生影响椎 间盘退变是否与缺氧环境有关这些都成为近年来学者们研究的重要课题骨钙素是骨转化的重要指 标能反应骨质疏松的状况 最近研究发现骨钙素参与诱导椎间盘软骨终板的退变钙化过程影响椎 间盘退变 本实验拟通过体外培养髓核细胞应用免疫学及组织化学原理对组织切片或细胞标本中 的某些化学成分进行原位的定性定位或定量研究判断缺氧环境是否是骨钙素变化的因素 收稿日期 基金项目 同济大学青年优秀人才培养行动计划 国家自然科学基金青年基金 浦东新区 卫生系统重点学科建设资助 通信作者 谭军中国上海市浦东新区即墨路 号同济大学附属东方医院脊柱外科邮编 王善金中国上海市浦东新区即墨路 号同济大学附属东方医院脊柱外科邮编 第 期 吴源徐源俊王善金等缺氧对体外培养髓核细胞骨钙素水平的影响 材料与方法 主要试剂和仪器 永生化人髓核细胞株上海拜力生物 基础培养箱 三气培养箱骨钙素检测试剂盒 一抗二抗中杉金桥公司 磷酸盐缓冲液 多聚甲醛试剂曲拉通 溶液牛血 清白蛋白 显色试剂盒倒置显微镜公司 免疫细胞化学染色检测髓核细胞常氧与需氧下