牛环形泰勒虫病PCR诊断方法的建立及其应用研究.pdfVIP

新疆农业科学2014，51(4)：741—748 Sciences XinjiangAgricultural doi：10．6048／j．issn．1001—4330．2014．04．023 牛环形泰勒虫病PCR诊断方法的建立 及其应用研究 王冰洁，郭庆勇，曹雯丽，张杨，李永畅，巴音查汗 (新疆农,Jk大学动物医学学院，乌鲁木齐，830052) 摘要：【目的】建立快速检测牛环形泰勒病的PCR诊断方法。【方法】根据牛环形泰勒虫裂殖子的表面抗原 (Tamsl)基因，设计一对特异性引物，以地方阳性病例提取的DNA为模板，用PCR扩增出目的条带，经克隆、 测序分析后，通过优化反应体系，建立牛环形泰勒虫病的PCR检测方法，并对该方法的特异性、敏感性进行验 证试验。【结果】测序结果表明，扩增的目的片段与已知基因序列相似性为99％；该方法检测与牛的其他血 液原虫无交叉反应，其最低检出限量为1．6×102 copies／斗L。应用所建立的PCR检测方法对新疆吐鲁番市周 419)。【结论】建立的牛环形泰勒虫PCR快速诊断方法具有有一定的特异性和敏感性，可用于牛环形泰勒虫 病的分子诊断和流行病学调查。 关键词：牛；环形泰勒虫；PCR；检测；应用 中图分类号：$852．7 文献标识码：A 文章编号：1001—4330(2014)04—0741—08 Establishmentand ofPCRMethodfor Application DetectionZ现Pf跆riaannulataInfectioninCattle WANG Bing—jiel，GUOQing—yong，CAOWen—li，ZHANGYang，LI (CollegeofFeterinaUMedicine，XinjiangAgriculturalUniversity，Urumqi830052，China) aimstoestablishPCR methodof detectionofTheileria Abstract：【Objective】Thisstudy diagnostic rapid of were tothezannulatamerozoitesurface annulata．【Method】A pairspecificprimersdesignedaccording thenthelocal casesDNSwasusedasa to antigen(Tamsl)gene，andpositive templateamplifytargetfragment PCR．After and detectionmethodofTheileriaannulatawasestablished by cloningsequencinganalysis，PCR thereaction and were se— throughoptimizing system．Finally，itsspecificitysensitivitystudied．【Result】The resultsshowed was tothe data．Themethodtested quencing genefragment99％sequencesimilaritypublished