临床医学毕业野生型mlk3真核表达载体的构建及其表达.docVIP

野生型MLK3真核表达载体的构建及其表达 姓 名： 2014年6月25日 野生型MLK3真核表达载体的构建及其表达 作者：金磊，岳军，杜彩萍，侯筱宇 【摘要】目的构建野生型MLK3真核表达质粒并转染至C0S-7细胞屮表达。 方法以大鼠海马总RNA为模板，通过RT-PCR分段扩增MLK3的序列，采用酶 切、链接的方法先将目的基因克隆至pGEM-T,筛选正确的质粒后，再亚克隆至 pcDNA3.1(+)o以脂质体转染法将构建好的重组质粒转染至COS-7细胞，通过免 疫印迹鉴定重组质粒的表达。结果限制性内切酶酶切和测序结果表明，扩增出 的野生型MLK3的序列正确。免疫印迹显示，转染的重组质粒在相对分子质量 92x103处宵相位条带出现。结论成功构建了 MLK3的真核表达质粒，重组质粒 在COS-7细胞中高效表达。 【关键词】 MLK3;克隆;真核表达 Abstract:Objective To construct the recombinant of wild-type MLK3 eukaryotic expression plasmid and to express the recombinant in transfected COS-7.Methods According to the cDNA sequence of MLK3 (GenBank, BC081952), the s