温泉土壤宏基因组文库构建及普鲁兰酶筛选.pdfVIP

ofSouthern 南方农业学报Journal 2014，45(5)：725—730 Agrieuhure ISSN2095—1191；CODENNNXAAB DOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．5．725 温泉土壤宏基因组文库构建及普鲁兰酶筛选 陆 坚1，杜丽琴1，庞浩2，马 贵1，韦宇拓1，黄日波2+ (1广西大学生命科学与技术学院／广西亚热带生物资N49护开,l用重点实验室，南宁530005 2广西科学院／国家非粮生物质能源工程技术研究中心，南宁530007) 摘要：【目的】构建温泉土壤宏基因组文库并进行普鲁兰酶活性筛选，以期获得高活力、耐高温的新型普鲁兰酶基 因。【方法】采用间接法提取温泉土壤样品中宏基因组DNA，经Sephadex 后，扩增16S 建温泉土壤宏基因组文库，并对所获得的宏基因组文库进行活性筛选。【结果】利用宏基因组技术提取温泉土壤样品 中微生物的基因组DNA，构建了一个约含1146个克隆的温泉土壤16SrRNA文库，经遗传进化分析，发现温泉土壤样 约含2．7万个克隆，平均插入片段长度为40．0 鲁兰酶活性的克隆。【结论】宏基因组文库技术是获取极端环境微生物新酶的有效手段，可为进一步挖掘普鲁兰酶的 应用潜力及研究其耐热机理奠定基础。 关键词：普鲁兰酶；宏基因组；16SrRNA；DNA文库；温泉土壤 中图分类号：$154．3 文献标志码：A Constructionofa fromhot soiland metagenomiclibrary spring of cloningpullulanasegene LU Gui Ri—b02+ Jianl，DU Ha02，MA1，WEIYu—tu01，HUANG Li—qinl，PANG Life and of Science of Bioresources (1College Technology，GuangxiUniversity／GuangxiKeyLaboratmTSubtropical ConservationandUtilization，Nanning of 530007，China) GuangxiAcademySciences，Nanning fromhot soilwasconstructedand wasscreened Abstract：【ObjectivelAmetagenonfielibraU spring pullulanaseactivity tofind DNAfromhot soilwasextractedindirect themlophilicpullulanasegenes．【Method]Themetagenonfie spring by lysis and method．and G200colunln 2％acid-washedPVPP el