9.13第三章-微生物菌种分离、筛选与育种.pptVIP

第三章 微生物菌种分离 筛选与育种 工业生产对生产菌种自身的特性提出了许多要求，这些要求是评价生产菌种优劣的标准和菌种选育工作的研究目标。 一般来说，优良的生产菌种应该具备如下的基本特性： ①具有在较短的发酵周期内产生大量发酵产物的能力。 ②在发酵过程中不产生或少产生与目标产品性质相近的副产物及其他产物。 ③生长繁殖能力强，生长速率快。 ④能够高效地将原料转化为产品。 ⑤有广泛利用不同来源原材料的能力，并对发酵原料成分波动敏感性较小。 ⑥对需要添加的前体物质有耐受能力，并且不能将这些前体物质作为一般碳源利用。 ⑦发酵过程中产生的泡沫要少。 ⑧具有抗噬菌体感染的能力。 ⑨遗传特性稳定，保证发酵过程能够长期、稳定地进行，同时有利于实施最佳的工艺控制。 以上是对优良菌种特性的要求，也是菌种选育工作研究和需要解决的问题。 生产菌种选育方法： 自然选育、诱变选育、抗噬菌体菌种选育、杂交育种、原生质体融合技术、基因工程技术等。 第一节 自然选育 自然选育: 不经人工处理，利用微生物自然突变进行菌种选育的过程。 自然突变原因： 1.多因素低剂量的诱变效应， 2.互变异构效应。 多因素低剂量的诱变效应： 是指自然界中低剂量的宇宙射线、各种短波辐射、诱变物质和微生物自身代谢产生的诱变物质等作用引起的突变。 互变异构效应： 指四种碱基第六位上的酮基或氨基的瞬间变构，会引起碱基的错配。 自然突变结果： 1.菌种退化--产物产量或质量下降； 2.菌种进化--对生产有益的突变。 注意： 在工业生产中，由于各种条件因素的影响，自然突变是经常发生的，也造成了生产水平波动，所以要注意从高水平的生产批次中，分离高生产能力的菌种再用于生产。 自然选育是一种简单易行的选育方法。但是自然选育的效率低，因此经常与其它育种方法交替使用，以提高育种效率。 自然选育程序: 　　取样→菌悬液→稀释→平板分离→单菌落→能力检测→菌种。 第二节 诱变选育 微生物有一套严密的代谢机制。其过程是被严格调控的，所有的代谢产物都不会过量积累。因此从自然环境中分离的菌种生产能力有限，一般不能满足生产的实际需要。 诱变育种是提高菌种生产能力，使所需要的代谢产物过量积累的有效方法之一。 3．1 诱变育种的原理 诱变育种的理论基础是基因突变，突变主要包括染色体畸变和基因突变两大类。 染色体畸变：是指染色体或DNA片段发生缺失、易位、逆位、重复等。 基因突变：是指DNA中的碱基发生变化即点突变。 诱变育种： 是利用物理、化学诱变剂处理微生物细胞，提高基因突变频率，再通过适当的筛选方法获得所需要的高产优质菌种的育种方法。 常用的诱变剂--物理、化学和生物的三大类，见下表。 2．2 诱变育种的基本方法 诱变育种----诱变和筛选 诱变----包括出发菌株选择、诱变剂种类和剂量选择，以及合理使用方法。 筛选----初筛和复筛，测定菌种的生产能力。 1）．出发菌株的选择 ①诱变出发菌株要有目标产物的生产能力； ②其它生产性能如生长繁殖快、营养要求低、产孢子多且早； ③对诱变剂敏感，则变异幅度大； ④产量、形态、生理等方面情况。 另外，可选择已经过诱变处理的菌株，这样的菌株对诱变剂的敏感。 2）．诱变剂的使用方法 诱变的方法：单一诱变和复合诱变。 单一诱变：指只用一种诱变剂处理菌种。 复合诱变：指两种以上诱变剂处理菌种。 复合诱变处理包括同一诱变剂多次处理、两种以上诱变剂同时、先后处理或多次处理。 3）．诱变剂剂量选择 对不同微生物使用的剂型、剂量不同，诱变剂的剂量与致死率有关，而致死率又与诱变率有一定的关系。因此，用致死率作为诱变剂剂量选择的依据。 一般来说，诱变率随诱变剂剂量的增加而提高，但达到一定程度以后，再提高剂量反使诱变率下降。 近年来已将处理剂量从过去的致死率99％～99.9%降至70％～80％，甚至更低。 2．3 突变菌株的筛选 诱变后，正向突变的菌株通常较少，菌种性能有可能发生各种各样的变异，如营养、抗性、代谢、形态、生长繁殖和温度等。这些变异菌种可用各种方法筛选。 通过初筛和复筛后，还要经过发酵条件优化研究，确定最佳发酵条件，使高产菌株生产能力充分发挥出来。 1）．营养缺陷型突变菌株的筛选 营养缺陷型突变菌株的诱变育种具有重要的理论研