7微生物的遗传和变异.pptVIP

4重组载体引入受体细胞 最广泛被应用的受体细胞 E.coli、Bacillus subtilis（枯草杆菌）。 引入方法: ①转化 ②病毒感染 3基因的体外重组 内切酶处理后 载体形成缺口 目的基因的切断 目的基因缝补上载体的缺口 （动力:氢键作用而相互吸引并形成共价结合)。 国家代表性菌种保藏机构 中国微生物菌种保藏委员会（CCCCM） 中国典型培养物保藏中心（CCTCC） 美国典型菌种保藏中心（ATCC） 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 荷兰霉菌中心保藏所（CBS） 第四节 菌种的衰退、复壮和保藏 1. 菌种的保藏 最有效的菌种保藏方法:冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 菌种保藏原理： ①选用优良的纯种 （最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等） ②创造有利于其休眠的良好环境。 降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变。 （干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等） 干燥和低温是菌种保藏的最重要因素。 加入介质可减少冷冻对细胞的损伤： 甘油和二甲基亚砜—透入细胞，降低脱水作用保护细胞； 海藻糖、脱脂牛奶、血清白蛋白等—与细胞表面结合防止细胞膜冻伤。 几种常用菌种保藏方法的比较 方法名称 主要措施 适宜菌种 保藏期 评价 冰箱保藏法（斜面） 低温 各大类 3~6月 简便 冰箱保藏法（半固体） 低温 细菌、酵母菌 6~12月 简便 石蜡油封藏法 低温、缺氧 各大类 1~2年 简便 砂土保藏法 干燥、无营养 产孢子微生物 1~10年 简便有效 冷冻干燥法 干燥、无氧、低温、有保护剂 各大类 5~15年以上 简便有效 衰退： 由于自发突变的结果，使某物种原有一系列生物学性状发生量变和质变的现象。 具体表现： ①原有形态性状不典型； ②生长速度变慢，产孢子少； ③代谢产物生产能力下降； ④致病菌对宿主侵染力下降； ⑤对外界不良条件抵抗力下降。 衰退的防止： ①控制传代次数； ②创造良好的培养条件； ③利用不易衰退的细胞传代； ④采用有效的菌种保藏技术。 菌种的复壮方法： 纯种分离法：分离衰退菌种的细胞群中仍保持原有典型性状的个体。 宿主体复壮：已衰退的病原菌接种到相应的宿主体中，通过获得“选 择性培养基”，一至多次选择，可从典型的病灶部位分 离到恢复毒力的复壮菌株。 低温淘汰法：将分生孢子采用-10~30℃处理5~7天，死亡率达到80%， 在抗低温存活下来的个体中留下未退化的个体。 2、菌种的衰退与复壮 思考题 1、证明核酸是遗传物质的3个经典实验？ 2、什么是质粒？它有哪些特点？ 3、什么是诱变育种，其基本操作步骤如何？ 4、原核微生物的体内基因重组方式（接合、转化、转 导） ？它们的区别如何？ 5、什么是基因工程？基本操作过程如何？ 6、如何控制菌种的衰退？ 7、菌种的常用保藏方法有哪些，其原理如何？ 生物的遗传变异有无物质基础，以及何种物质可执行遗传变异的功能，是生命科学中的一个重大的基础理论问题。 围绕这一问题，曾经有过很多推测和争论。 + 染色体由蛋白质和核酸两种长链状高分子组成。 由于蛋白质可由成百上千的氨基酸组成，而氨基酸有20多种，因此人们一度认为生物的遗传型的的是蛋白质。 直至， Avery 以微生物为研究对象进行的实验，无可辩驳的证实了遗传的物质基础不是蛋白质而是核酸。 肺炎球菌是一种球形细菌，能够使人患肺炎，小白鼠患败血症而死亡。它有几种不同的菌株，一种具有荚膜，菌落表面光滑，有致病性，称为S型，另外一种没有荚膜，菌落表面粗糙，没有致病性称为R型。 图中为GRIFFITH做的一个动物实验。实验中把+陈述图 从实验结果可知： 小鼠致死的原因为IIIs菌株的毒性，但是IIIS从何而来呢？ 注入到体内的iiis菌全部被杀死，不可能是其残留； 也不能是Rii的回复突变，因其回复突变型应为SII; 合理解释为：活的非致病性的RII从已被杀死的Siii型中获得了遗传物质，使其产生荚膜成为致病性的Siii。 Griff把这种现象成为转化。 转化实验中，到底杀死的IIIS型菌株中何种细胞成分为在转化作用中起到关键作用的转化因子呢？ AVERY从S菌种抽提各种细胞成分（核酸、蛋白质、荚膜多糖），然后将提取的各组分应用于R菌的转化实验。 结果表明，+ DNA为遗传的物质基础。 根据放射性元素含量的分配，确定沉淀为大肠杆菌感染细胞，其内含有噬菌体DNA，上清为噬菌体外壳。 沉淀细胞经培养后，可产生大量子代噬菌体，表明含有噬菌体DNA 的大肠杆菌感染细胞能够产生大量噬菌体后代。 然而，在噬菌体侵