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教学提示: 1)主要理解遗传物质在细胞内存在的部位和方式、理解其中的概念、术语(如遗传型、表型、染色体、核基因组、基因、操纵子、密码子、碱基对、质粒、F因子、Ti质粒等等)。 2)掌握基因突变的特点、重要类型及证明基因突变自发性和不对称性的平板影印实验的原理和应用。 3)了解基因突变的机制并着重了解紫外线对DNA的损伤及其修复方式。 4)重点掌握从自然界分离微生物和诱变育种的原理和方法,并着重领会增殖培养、平板分离、诱变准备和诱变操作、筛选方法的设计、以及营养缺陷型突变株的筛选策略等; 5)重点掌握菌种衰退的原因、防治办法、复壮的方法和菌种保藏的原理、常用方法及其适用范围。 因此: 只有核酸(DNA)才是 负载遗传信息的真正物质基础。 大肠杆菌基因组很大(全部转移 需要100分钟),其遗传图谱须用 多株F因子整合在不同位置的Hfr 菌才能完成 3)F′×F-杂交 Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离染色体时,形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子,特称为F′因子。 F′×F-与F+×F-的不同: 供体的部分染色体基因随F′一起转入受体细胞 a)与染色体发生重组; b)继续存在于F′因子上,形成一种部分二倍体; 细胞基因的这种转移过程又常称为性导(sexduction)、F因子转导(F-duction),或F因子媒介的转导(F-mediated transduction)。 “接合” “转导” 及“转化”这三种在自然界中存在的细菌遗传重组过程各自的特点: 外源DNA的来源及进入途径有差异 (四)原生质体融合 二、真核微生物的基因重组 (一)有性杂交 细胞( +) 细胞(-) 有性接合 染色体重组 新遗传型 能产生有性孢子的酵母菌、霉菌和蕈菌都可以进行有性杂交 (二)准性杂交 细胞( +) 细胞(+) 准性接合 基因重组 新遗传型 菌丝联结 质配 核配 有丝分裂交换 单倍体杂合子 在半知菌类中最为常见 半知菌的准性生殖 准性杂交育种 第四节 基因工程 特点:可设计性、稳定性、远缘性、风险性 一、基因工程 定义:在基因水平上,改造遗传物质,从而使物种发生变异,创建出具有某种稳定新性状的生物新品系。 获得目的基因 选择基因载体 体外重组 外源基因导入(细菌、植物、动物、基因枪) 筛选和鉴定 应用 二、基因工程的基本操作 第五节 菌种的衰退、复壮和保藏 性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求,否则生产或科研都无法正常进行。 影响微生物菌种稳定性的因素:a)变异;b)污染; c)死亡。 一、菌种的衰退与复壮 菌种衰退的原因:大量群体中的少数个体产生自发突变 纯菌种 自发突变 不纯菌种 突变个体 传代增殖 原始个体 衰退菌种 衰退:菌种出现或表现出负变性状 方法:从衰退的菌种群体中把少数未变的个体再找出来,重新获得具有原有典型性状的菌种。 a)纯种分离; b)通过寄主体进行复壮; 注意: 有意识地利用微生物会发生自发突变的特性,在日常的菌种维护工作中不断筛选“正变”个体。 菌种的复壮: 二、防止衰退的措施 1)减少传代次数; 2)创造良好的培养条件; 3)利用单核体传代 4)经常进行纯种分离,并对相应的性状指标进行检查; 5)采用有效的菌种保藏方法; 三、菌种保藏 目的:在一定时间内使菌种不死、不变、不乱,以供研究、生产、交换之用 基本原则:1、挑选典型菌种的优良纯种 2、尽量使用分生孢子、芽孢等休眠体 3、创造有利于休眠的保藏环境(如干燥、 低温) 4、尽可能多的采用不同的手段保藏一些比 较重要的微生物菌株 基本方法 培养基传代培养(斜面、平板) 寄主传代培养 低温(液氮、低温冰箱) 干燥(沙土管、真空干燥) 生活态 休眠态 冷冻干燥保藏法和液氮保藏法 1) 细胞水平 真核微生物:细胞核 原核微生物:核区 细胞核或核区的数目在不同的微生物中是不同的 2) 细胞核水平 真核生物 细胞核 核染色体 原核生物 核区 DNA链 核基因组 (genome) 在核基因组之外,还存在各种形式的核外遗传物质 1.6 紫外线对DNA的损伤及其修复 嘧啶 嘧啶
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