MF17M5HiperRTcDNASynthesisKit加强型第一链cDNA反转录.DOCVIP

北京聚合美生物科技有限公司 Mei5 Biotechnology, Co., Ltd 北京市海淀区学院路甲5号768创意园B-1211 热线电话： （86）010M5 Hiper RT cDNA Synthesis Kit 使用说明书 产品名称 单位 货号 M5 Hiper RT cDNA Synthesis Kit 25T MF173-01 M5 Hiper RT cDNA Synthesis Kit 100T MF173-04 【储存条件】 长期保存，请置于-20?C，有效期12个月。使用后请及时放入-20?C保存以保证酶的活性。 【产品简介】 本产品是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒中使用的逆转录酶是一种利用大肠杆菌工程菌进行重组与表达的全新高效逆转录酶，去除了RNase H活性并增强了其热稳定性，可利用极低量的总RNA或mRNA合成cDNA第一链，起始样本量可低至pg级。HiperRT逆转录酶与RNA亲合能力强，能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板，获得高产量的cDNA。 　　本产品包含从RNA模板逆转录成cDNA第一链所需的所有试剂，含有HiperRT高效逆转录酶、反应缓冲液、引物、dNTP等，使用简单方便。本系统对后续的PCR以及定量PCR试验兼容性高，适用各种PCR反应的DNA聚合酶。 【产品特点】 1) 高效逆转录：与RNA模板亲和力高，逆转录效率高达90%，可识别pg级别的模板。 2) 自由应对复杂模板：即使GC含量高，二级结构复杂的模板，无需高温变性，也可得到良好结果。 【产品组分】 25T 100T M5 HiperRT (200 U/μl) 25 μl 100 μl 5x HiperRT Buffer 120 μl 500 μl Primer Mix 60 μl 240 μl dNTP Mix, 2.5 mM 120 μl 500 μl RNase-Free Water 1 ml 2x1ml 【注意事项】 1．在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。 2．实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1％DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。 3．本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。 4．若起始RNA的量小于50 ng，建议加入RNA酶抑制剂。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：MF010。 【操作流程】 注意：1 ng-5 μg总RNA可建立20 μl反应体系，如果总RNA量大于5 μg，请按比例扩大反应体系。 A、 常规反转录操作步骤： 1．将RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、5x HiperRT Buffer、HiperRT和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。 2. 在 DNase/RNase-free 离心管中加入下列成分： 5x HiperRT Buffer 4 μl Primer Mix 2 μl dNTP Mix, 2.5mM each 4 μl RNA 模板 X μl (1~5 μg 总 RNA 或 0.1~0.5 μg poly(A) mRNA) HiperRT, 200U/μl 1 μl RNase-Free Water 补足至 20 μl 注意：1）若起始RNA的量小于50 ng，则建议加入RNA酶抑制剂（RNa