急性白血病细胞系中SFRP基因启动子甲基化及去甲基-北京大学学报.PDF

中国病理生理杂志　ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　２０１３，２９（８）：１４４７１４５１ ·１４４７· ［文章编号］　１０００４７１８（２０１３）０８１４４７０５ 急性白血病细胞系中ＳＦＲＰ基因启动子甲基化及 去甲基化诱导表达的研究 １△ ２ １ １ １ １ １ ３ 徐成波 ，　冯　敏 ，　廖　斌 ，　皇甫真萍 ，　齐　彦 ，　陈毅宁 ，　陈佳薇 ，　沈建箴 １ ２ （福建中医药大学附属人民医院血液科，福建 福州３５０００４；福建省立医院北院，福建省老年医院内分泌科， ３ 福建 福州３５０００１；福建医科大学附属协和医院血液科，福建 福州３５０００１） 　　［摘　要］　目的：探讨分泌型卷曲相关蛋白（ＳＦＲＰ）基因家族启动子ＣｐＧ岛异常甲基化状态与急性白血病 （ＡＬ）发生发展的关系，以及 ＤＮＡ甲基转移酶（ＤＮＭＴ）抑制剂５氮杂２脱氧胞苷酸（５ＡｚａＣｄＲ）去甲基化诱导 ＳＦＲＰ基因表达作用的可能机制。方法：采用甲基化特异性 ＰＣＲ检测不同ＡＬ细胞系（Ｍｏｌｔ４、Ｊｕｒｋａｔ、ＨＬ６０和 ＮＢ４）和不同浓度５ＡｚａＣｄＲ作用下Ｊｕｒｋａｔ细胞系中ＳＦＲＰ１、ＳＦＲＰ２、ＳＦＲＰ４和ＳＦＲＰ５基因启动子区的甲基化状态， 采用实时荧光定量ＲＴＰＣＲ检测ＳＦＲＰ１、ＳＦＲＰ２、ＳＦＲＰ４和ＳＦＲＰ５ｍＲＮＡ表达，采用半定量 ＲＴＰＣＲ检测 ＤＮＭＴ１、 ＤＮＭＴ３Ａ和ＤＮＭＴ３ＢｍＲＮＡ表达。结果：在正常人细胞中不存在ＳＦＲＰ基因的甲基化。ＳＦＲＰ１、ＳＦＲＰ２和ＳＦＲＰ５ 基因在ＨＬ６０、ＮＢ４、Ｍｏｌｔ４和Ｊｕｒｋａｔ细胞系中均呈完全甲基化状态；ＳＦＲＰ４基因在ＮＢ４、Ｍｏｌｔ４和Ｊｕｒｋａｔ细胞系中完 全甲基化，在ＨＬ６０细胞系中则部分甲基化。５ＡｚａＣｄＲ可逆转ＳＦＲＰ１、ＳＦＲＰ２、ＳＦＲＰ４和ＳＦＲＰ５基因的高甲基化 状态，并能够下调 ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ和ＤＮＭＴ３ＢｍＲＮＡ水平，诱导ＳＦＲＰ基因恢复表达。结论：在ＡＬ细胞系中， ＳＦＲＰ１、ＳＦＲＰ２、ＳＦＲＰ４和ＳＦＲＰ５基因出现高甲基化，与ＡＬ的发生密切相关，可能成为ＡＬ新的基因标志物。５Ａｚａ ＣｄＲ通过抑制ＤＮＭＴ表达，逆转ＳＦＲＰ基因的甲基化状态，恢复其表达。 ［关键词］　急性白血病；ＤＮＡ甲基化；分泌型卷曲相关蛋白；５氮杂２’脱氧胞苷酸 　　［中图分类号］　Ｒ７３０．２３　　　　　［文献标志码］　Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００４７１８．２０１３．０８．０１９ Ｐｒｏｍｏｔｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｓｔａｔｕｓａｎｄｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ ＳＦＲＰｇｅｎｅｓｉｎｈｕｍａｎａｃｕｔｅｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｌｉｎｅｓ １ ２ １ １ １ ＸＵＣｈｅｎｇｂｏ，ＦＥＮＧＭｉｎ，ＬＩＡＯＢｉｎ，ＨＵＡＮＧＦＵＺｈｅｎｐｉｎｇ，ＱＩＹａｎ，ＣＨＥＮＹｉ １ １ ３ ｎｉｎｇ，ＣＨＥＮＪｉａｗｅｉ，ＳＨＥＮＪｉａｎｚｈｅｎ １ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ，ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＰｅｏｐｌｅｓＨｏｓｐｉｔａｌ，ＦｕｊｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｕｚｈｏｕ ２ ３５０００４，Ｃｈｉｎａ；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，ＮｏｒｔｈＢｒａｎｃｈｏｆＦｕｊｉａｎＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＨｏｓｐｉ