细胞骨架的光学显微镜观察.PPT

* 细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据其组成成分和形态结构可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输，能量转换，信息传递，基因表达等起到重要作用。 * The structures and functions of cytoskeleton are mainly controlled by its binding proteins. Actin filaments are likewise strongly affected by the binding of accessory proteins along their sides. Actin filaments in most cells are stabilized by the binding of tropomyosin, an elongated protein. Which can prevent the filament from interacting with other proteins. Another important actin filament binding protein, cofilin, present in all eucaryotic cells, which destabilized actin filaments(also called actin depolymerizing factor). Cofilin binds along the length of the actin filament, forcing the filament to twist a little more tightly. In addition, cofilin binding cause a large increase in the rate of actin filament treadmilling. 成核蛋白（nucleating proteins）: actin-related proteins, ARPs 单体隔离蛋白（monomer sequestering protein）: thymosin(胸腺素) 封端（加帽）蛋白（End-blocking(capping) proteins）:capZ 单体–聚合蛋白（monomer-polymerizing proteins）:抑制蛋白（profilin）是一种与ATP-肌动蛋白单体结合的蛋白质 肌动蛋白纤维解聚蛋白（actin filament-depolymerizing proteins）: coflin、ADF以及蚕食蛋白与肌动蛋白纤维的减端结合，大大促进肌动蛋白纤维解聚成单体。 交联蛋白（cross-linking proteins）: ABP280和细丝蛋白,促进形成近于正交相互联系的纤维松散网络 纤维–切割蛋白（filament-severing proteins）: gel-solin 膜结合蛋白（membrane-binding proteins）:连接膜与肌动蛋白的蛋白质包括联结蛋白（vinculin），ERM家族的成员包括埃兹蛋白（ezrin）、根蛋白（radixin）和膜突蛋白（moesin） 实验十一 细胞骨架的光学显微镜观察 【实验目的】 了解细胞骨架的结构特征及其制备技术，掌握考马斯亮蓝R250染细胞胞质微丝的方法。 免疫细胞化学技术：利用免疫反应定位组织或细胞中抗原成分分布的一类技术。分为免疫荧光技术和免疫电镜技术（免疫铁蛋白技术、免疫酶标技术、免疫胶体金技术）。 Microbubules Microfilamemts Intermediate filaments Cytoskeleton 【实验原理】 当用适当浓度的Triton X-100处理细胞时，可将细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色后，可在光学显微镜下观察到微丝。 微丝是肌动蛋白亚单位组成的螺旋状纤维，在不同种类的细胞中，它们与某些结合蛋白一起形成不同的亚细胞结构，如张力纤维、肌肉细丝等。张力纤维在体外培养动物细胞中普遍存在，与细胞对基质的附着、维持细胞扁平铺展的形状有关。 考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料．它可以使各种细胞骨架蛋白质着色，并非特异地显示微丝，但是由于有些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定，例如微管；还有些类型的纤维太细，在光学显微镜下无法分辨，因此我们看到的主要是微丝。 Actin-binding proteins(微丝结合蛋白) ◆ monomer-sequestering