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高中生物 选修3现代生物科技专题 专题1 基因工程 一、 DNA重组技术的基本工具 基本工具： 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” （二） DNA连接酶——“分子缝合针” E·coli DNA 连接酶 T4 DNA 连接酶 DNA连接酶——“分子缝合针” 区别： E·coli DNA 连接酶 只能将双链DNA片段互补的粘性末端之间连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接 T4 DNA 连接酶 既可“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可 “缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低 DNA连接酶和 DNA聚合酶的异同： 基因工程中所用的连接酶有两种：从大肠杆菌中分离得到的E·coli连接酶、从T4噬菌体中分离得到的T4连接酶。这两种酶的催化反应基本相同，都是连接双链DNA的缺口，不能连接单链DNA。连接酶和聚合酶的作用都是形成磷酸二酯键。 DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键。 DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成子链；而连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，因此连接酶不需要模板。 两者都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” * * 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术，是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞内，定向的改造生物的遗传性状。 基因工程的定义： 理论基础： 基本原理： 1.不同生物的基因结构上具有一定的相似性： （1）基因的基本单位相同 （2）具有相同的碱基互补配对原则 （3）都是双螺旋结构 2.不同生物共用一套密码子。 基因重组 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基 因 DNA分子水平 剪切→重组→导入→表达 定向改造生物性状 3.作用结果：切割DNA分子产生两种类型的末端：黏性末端或平末端 2.作用：识别特定的核苷酸序列并水解特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。因此具有专一性。 大多数限制酶能够识别的序列均为6个核苷酸（个别4、5、8） 1.来源：主要来自于原核生物，如：大肠杆菌细胞内可分离出E.coRI限制酶 （一）“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 4.举例：大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端，SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端 。 切割DNA分子时产生的两种不同末端 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 DNA分子的切割和连接 “分子缝合针”－－DNA连接酶 T4DNA 连接酶 E.coliDNA 连接酶 功能 来源 种类 大肠杆菌 T4噬菌体 只能连接黏性末端形成磷酸二酯键 既能连接黏性末端也能连接平末端形成磷酸二酯键 （三）“分子运输车” －－基因进入受体细胞的载体 1.常用载体： 2.载体需要具备的条件 （1）能够自我复制 （2）有一个或多个切割位点 （3）有标记基因 （4）对受体细胞无害 （5）大小要合适 3.其他载体： λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 质粒（存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是拟核DNA（染色体DNA）以外能够自我复制的小型环状DNA分子） 大肠杆菌及质粒载体结构模式图 *