1微生物学实验诊断.pptx

微生物学实验诊断;微生物学实验诊断;诊断学;微生物学实验诊断;2019/4/11;一、微生物学检验：从样本到报告;采集原则：早期、无菌、方法、适量、安全 标本处理 1. 对环境敏感的细菌保温立即送检，其他最好2h内 2. 适宜环境保存，一般不应超过24h 3. 注意安全防护（避免接触血液或其他体液，减少感染风险，减少院内感染的传播，戴手套接触血液和体液，黏膜破损皮肤和处理的物品或表面沾了病人的血液或体液，立即彻底洗手和其他皮肤表面，每一个病人换手套） 4. 标本切勿污染，容器必须包装好 5. 烈性传染病标本，必须按规定包装，由专人运送 6.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送 ;形态学检查;不染色标本 1. 直接镜检，检查细菌的动力及运动状况（压滴法和悬滴法） 有动力：自一处移至另一处，有明显的方向性位移 无动力：布朗运动，只在原地颤动而无位置的改变 2.有些病原菌可作出初步鉴定 疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似流星状运动的细菌，制动试验阳性，初步推断为“疑似O1群霍乱弧菌”。;染色标本 1．革兰染色（gram stain） 革兰阳性球菌 革兰阴性杆菌;2．抗酸染色（acid-fast stain）将细菌分为两大类：即-抗酸性细菌-非抗酸性菌 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。 3．荧光染色 敏感性强，效率高。 用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。（金胺荧光素染色法，在荧光显微镜下抗酸性细菌呈现金黄色荧光，检测结核分枝杆菌。） 4.鞭毛染色 有无鞭毛、鞭毛的位置及数量 5.异染颗粒染色 用于白喉棒状杆菌染色。 6.芽胞染色： 7.墨汁染色:;分离培养和鉴定;培养基（culture medium） 人工方法配制，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。 根据标本来源和可能存在的病原菌，确定选用各种分离培养基。伊红美蓝/麦康凯用于筛选革兰阴性杆??。（当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。）;1．平板划线分离法 2．斜面接种法 3．液体接种法;细菌培养方法 1．需氧培养法 2．二氧化碳培养法 3．厌氧培养法 ;生化反应和鉴定 （一）碳水化合物的代谢试验 1. 糖（醇、苷）类发酵试验 2．氧化―发酵试验（O/F试验）（葡萄糖氧化发酵试验，在细菌鉴定中，糖类发酵产酸是1项重要依据。细菌对糖类的利用有2种类型:1种是从糖类发酵产酸，不需要以分子氧作为最终受氢体，称发酵型产酸;另一种则以分子氧作为最终受氢体，称氧化型产酸。） （二）蛋白质和氨基酸的代谢试验 1．明胶液化试验 主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。（肠杆菌科细菌的鉴别，如沙雷菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶，而其他细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。） 2．吲哚(靛基质)试验 主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。（吲哚试验是指有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚(靛基质)，经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，则为吲哚试验阳性。） 3．硫化氢试验 培养基：醋酸铅培养基 应用：肠杆菌科中属及种鉴别;（三）碳源和氮源利用试验 1．枸橼酸盐利用试验（枸橼酸盐利用试验是以枸橼酸钠为唯一碳源、PH值7.0的培养基上，产气杆菌分解枸橼酸钠产生碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，培养基中指示剂溴麝香草酚蓝(BTB)由浅绿色变为深蓝色，此为枸橼酸盐利用试验阳性。大肠杆菌因不能利用枸橼酸盐，此试验为阴性反应。） 用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。 2．丙二酸盐利用试验（用幼龄菌种接种测定培养基和空白培养基，于适温培养1－2d，观察培养基变色情况。如测定培养基生长并变蓝色，表示可利用丙二酸盐，为阳性结果。反之，如测定培养基未变色，而空白对照培养基生长，则为阴性，即不利用丙二酸盐。亚利桑那和克雷伯菌属为阳性，枸橼酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属中有些菌种也呈阳性反应，其他各属均为阴性。） 肠杆菌科中属间及种的鉴别。 （四）各种酶类试验 1．氧化酶试验（细菌在与试剂