基质细胞衍生因子SDF-1α,C-MYC调控基因神经激肽受体1表达的研究-基础医学;免疫学专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的： 研究乳腺癌细胞在发生骨转移过程中速激肽(tachykinin)及其受体NKlR 表达状况，原癌基因c-myc表达产物如何调控神经激肽受体l(NKIR)；基质 细胞衍生因子SDFI．n在C．MYC调控基因NKlR表达中所起的作用。 方法： 1．应用染色质共沉淀试验验证转录因子C．MYC是否作用NKlR基因转录起始点 上游含E盒调控序列。 2．用巢式PCR和重叠延f0PCR克隆基因NKIR转录起始位点上游序列即启动 子，构建野生型和突变型启动子荧光素酶报告基因载体，与内参质粒同时转染 乳腺癌细胞，评价野生型和突变型NKlR启动子如何启动下游基因表达。 3．构建c-myed,q：扰RNA表达载体，评价C—mye+乘lc-mye一细胞组基因c．myc恭l NKlR表达水平。 4．在培养基中iJHSDF．1a中和抗体，评价C．MYC如何调控NKlR基因的表达。 结果： 1．转录因子C．MYC能够作用基因NKlR转录起始点上游E盒。 2．在正常培养条件卞，C．MYC能够通过激活含E盒NKlR启动子而启动下游基 因表达。 3．在正常培养条件下，转录因子C．MYC能够反式激活NKlR基因的表达。 4．在SDF．1a因子缺乏状态下，转录因子C．MYC反式激活NKlR基因表达的能力 消失，甚至逆转。 结论： 转录因子C．MYC能够作用基因NKIR调控区；NKIR基因启动子在C．MYC 的调控下能够启动下游基因的表达，C．MYC能调控NKlR基因的表达；SDF．1a 因子能够影响转录因子C．MYC调控基因NKIR的表达。 关键词t乳腺癌骨转移报告基因载体基因沉默前速激肽原NKlR 天津医科人学硕士学位论文Abstract 天津医科人学硕士学位论文 Abstract Objective： To investigate the expression ofgene tachykinin and NKlR in breast cancef cell． To test how transcription factor C-MYC regulate NK I R expression．to identify what roles SDFl一Q play in the process ofC—MYC regulating NKIR． Method： 1．Chromatin Immunoprecipitation Assay was employed for testing whether C-MYC binds to gene NKl R 5’upstream promoter region． 2．Wild and mutation type of NKI R 5’upstream promoter region was cloned by Nested PCR and ov甜ap Extension PCR．Wild and mutation luciferase report gene vectors were constructed and cotransfected with reference plasmid in MCF一7 cell，to evaluate how wild and mutation NKl R promoter regulate downstream gene expression． 3．c-myc shRNA vetor for gene interferencing was constructed，to determine the NKI R and c-myc expression level in c-myc-and c-myc+cell group． 4．Neutral antibody SDF．1 a was used for removing breast cell autocrine SDF-l a cytokine in culture media,under this condition，assess C·MYC regulate NKl R expression． Result： 1．Transcription factor C．MYC can bind to 5upstream E-box ofNKI R gene． 2．Under normal culture condition，C-MYC Can transactivate genes expression downstream ofNKl R promoter． 3．Under normal culture condition，C—MYC Can transactivate