卡介苗多糖核酸-DDA在结核亚单位疫苗中的佐剂效应研究-病原生物学专业毕业论文.docxVIP

兰州大学硕士毕业论文内容摘要幸 兰州大学硕士毕业论文 内容摘要幸 结核病在世界范围广泛流行，目前已成为严重的公共卫生问题，接种结核疫 苗被认为是预防结核病发生与传播的最佳方法。减毒牛型结核分枝杆菌株(BCO) 是目前世界上许多国家批准应用于人体的唯一抗结核疫苗。BCG对儿童保护效 果较好，但对成人肺结核的保护效果较弱。因此，目前有多种类型的结核疫苗正 处于实验阶段。其中融合蛋白疫苗是最有发展前景的新型结核疫苗之一。蛋白亚 单位疫苗的蛋白成分仅包含保护性抗原，缺少具有自我佐剂作用的免疫成分，免 疫原性较弱。因此，需要使用适当的佐剂增强疫苗的免疫效果。 为了筛选有效的结核亚单位疫苗免疫佐剂，本研究制备卡介苗多糖核酸 (BCG—PSN)一二甲基三十六烷基铵(DDA)作为结核融合蛋白疫苗的佐剂， 并研究其免疫佐剂效应。本研究工作包括两个方面：结核亚单位疫苗制备和疫苗 免疫特性的研究。 1．结核亚单位疫苗制备 本研究首先应用改良的热酚法制备了BCG．PSN，经测定其多糖和核酸含量、 残留蛋白质含量均比较理想。进一步进行了BCG．PSN的异常毒性实验，应用不 同浓度的样品腹腔注射BALB／c小鼠(分别按照100／,g／只、60,ug／只、20／比g／只 剂量，对照组生理盐水)，观察实验小鼠各项反应。结果显示：在选用的高中低 剂量组，小鼠各项指标正常，未检测到毒性反应。实验结果表明应用改良的热酚 法可以成功制备BCG—PSN，制成品安全、无毒。 随后，应用亲和层析法表达纯化了融合蛋白AMM(A985B-MPT64190qga- Mtb8．4)并将不同的待选佐剂和对照物与AMM蛋白按照比例混合。分别得到含 有不同佐剂的AMM+PBS、AMM+DDA、AMM+BCG--PSN、AMM+BCG．PSN —DDA、AMM+IFA五种待选疫苗。 2．结核亚单位疫苗免疫特性的研究 将上述五种待选疫苗皮下免疫C57BL／6小鼠，设立BCG、生理盐水、 BCG．PSN--DDA对照组。应用ELISA及ELISPOT技术检测免疫小鼠的体液与 ’本研究得到鱼塞型撞部863项目资助，项目编号：2006AA022420。 1 兰州大学硕士毕业论文细胞免疫反应。结果显示：与其他佐剂对照组和生理盐水对照组相比，BCG．PSN 兰州大学硕士毕业论文 细胞免疫反应。结果显示：与其他佐剂对照组和生理盐水对照组相比，BCG．PSN —DDA佐剂组小鼠在第3次免疫4周后血清抗体滴度较理想，细胞免疫水平较 高。分别应用特异性抗原A985B、PPD、Mtb8．4、MPT64190-198刺激免疫小鼠脾 脏淋巴细胞，并测定每lxl06个脾淋巴细胞分泌IFN-y的细胞数，AMM+BCG．PSN —DDA疫苗组的结果均较为理想。根据实验结果，认为结核亚单位疫苗 AMM+BCG．PSN--DDA能够引起较强的细胞免疫和体液免疫；BCG．PSN--DDA 具有较强的免疫佐剂效应，能诱导体液免疫和Thl型细胞免疫应答。进一步分 别检测了以不同剂量的蛋白和佐剂构建的亚单位疫苗的免疫效果，初步认为以 AMM蛋白20／比g、BCG-PSN 100／【lg和DDA 250／比g剂量构建的疫苗免疫效果较为 理想。 结论：结核亚单位疫苗AMM+BCG．PSN--DDA能够诱导较强的体液免疫和细胞 免疫反应，并且其诱导以Thl型细胞免疫为主的免疫反应，是有潜力的抗结核 候选疫苗；BCG．PSN--DDA是一种安全、效果较好的新型疫苗佐剂。 经佐剂和蛋白不同剂量的配伍实验，已基本确定我们构建的结核融合蛋白亚 单位疫苗中蛋白和各佐剂成分的最佳剂量比，初步认为以AMM蛋白20／zg、 BCG—PSN 100／[19和DDA250／比g剂量构建的疫苗免疫效果较为理想。 关键词： 结核病； 结核分枝杆菌： 亚单位疫苗； 佐剂； 二甲基三十六 烷基铵； 卡介苗多糖核酸； 融合蛋白AMM； 免疫效果 中图分类号：R37 Il 兰州人学硕士毕业论文Abstract 兰州人学硕士毕业论文 Abstract Tuberculosis Oa3)is an epidemic diease worldwide，and has become a serious public health problem．Tuberculosis vaccine inoculation is considered the best way to control the spread of tuberculosis．Most of the world’S population is vaccinated with the only available vaccine against tuberculosis(邛)，th