课件：新生儿溶血三项检测的临床应用000.ppt

THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * 母子之间ABO血型是否相合也有较大的关系 * * 注意事项 如血清与相应红细胞在37 ℃水浴中致敏1小时，75%的抗体吸附于红细胞上，如致敏2小时，则抗体吸附达95%；如以低离子盐水溶液代替生理盐水配制5%红细胞悬液，则致敏时间可减少至15-30分钟，但抗Fy抗体需较长的孵育时间。 红细胞洗涤应迅速、彻底。要将生理盐水用力冲入管底，使管底红细胞松散分离。要防止手上的蛋白质污染。1滴1:4000稀释的血清可中和抗球蛋白血清1滴，导致假阳性结果。 离心速度和时间非常重要，应取能使阳性对照管出现阳性反应的最小离心力和最短离心时间。 注意事项 当红细胞上的抗体分子数量在500个以上时在有利于抗球蛋白与不规则抗体的结合，当红细胞上抗体数量较少，可通过反复离心、摇摆，在离心的方法，增加抗原抗体的接触，提高阳性率。 如果检测的抗体为补体依赖抗体，则必须加入新鲜AB型血清. 试剂：多特异性抗球蛋白试剂（IgG、C3d）；已知抗体血清（用于检测特殊红细胞抗原）：5%已知抗原的红细胞盐水悬液（用于检测血清中不完全抗体）；5%D阳性红细胞盐水悬液（阳性对照用）；不完全抗D血清：AB型血清。 抗人球蛋白试验的应用 直接法： 常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自身免疫性贫血和医源性溶血性疾病等的检测。 间接法： 多用于检测母体Rh（D）抗体，以便及早发现和避免新生儿溶血症的发生。亦可对红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测。 游离试验 检查新生儿血清中游离抗体： 将新生儿血清与标准A(B)细胞（与新生儿同种 红细胞） 做间接抗人球蛋白试验，阳性结果， 则表示有抗体存在。 新生儿血清中游离抗体检查结果 意义 指示红细胞 意义 AC BC OC + - - 游离的抗-A - + - 游离的抗-B + + - 游离的抗-A抗-B或-AB +- +- + 游离的ABO系统以外的抗体 - - - 无游离抗体 放散试验 放散试验原理 抗原与抗体的结合是可逆的。在物理和化学的条件 改变时，抗体又会从抗原抗体复合物上分离下来，将 抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试验称为放散试 验。 放散液 用放散试验 技术将大量附着于红细胞上的 抗体放散到小量的生理盐水中，这种含有抗体 的溶液称为放散液 放散液中的抗体具有特异性，可以与相应 抗原结合，从而可以进一步确定抗体的特异性。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 热放散试验 主要应用ABO 血型系统新生儿溶血病及从 红细胞上洗脱掉IgM及IgG抗体。此方法制备抗 体最容易，但抗体回收较差，即如果抗体较弱， 放散试验可得到假阴性的结果。 其优点是适用于一般化验室，缺点是放散 液中含有较多游离白蛋白。 热放散试验方法 1.将疑有抗体包被的红细胞用生理盐水洗涤3-4次，最后一次尽量吸取红细胞上层的生理盐水。 2.在压积红细胞中加等量生理盐水（也可用AB血清或6%牛血清白蛋白），置 56℃水浴箱中10分钟，期间摇动数次（15-30S摇动1次）。 3.取出后立即高速离心，3000 转/分钟；取上清液（樱红色的上清液即为放散液），与已知红细胞试验。按不同试验要求做试验，将放散液作为抗体使用。 热放散试验注意事项 鉴定放散液应与原抗原抗体反应方法相同，如抗体较弱，可用酶处理红细胞做试验 放散液用生理盐水制备不稳定，若要保存放散液，用AB血清进行放散 受检血清与吸收用红细胞比例要高一些，若抗体弱，可以充分与红细胞结合 加热放散温度要准确，如温度降低，放散出的抗体又会重新与抗原结合 放散抗体时，应不断摇动，促使抗体从抗原抗体复合物上分离下来 乙醚放散试验 主要应用于温自身抗体（IgG）或同种抗体 引起的直抗阳性，以及用于分离IgG抗体混合物 其最大优点是适用于检查获得性溶血性贫 血，鉴定Rh抗体效果最好，不宜用于 ABO 抗 体鉴定 酸放散 放散试验的应用 鉴定新生儿溶血病患儿红细胞上的抗体 在溶血性贫血和可疑输血反应中，用来鉴定产生直抗阳性的红细胞 制备少量的单特异性