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超滤是一种除去样品中蛋白质和其他大分 子的方法，利用分子分离的薄膜分离技术， 依靠薄膜两侧压力差作为推动力来分离溶 液中不同分子量的物质。 超滤膜的制作材料有醋酸纤维素、聚酰胺、 聚砜等，其中醋酸纤维素最常用。 与沉淀法相比，超滤的优点在于适用于小量 样品，不用稀释样品也不用改变样品的pH 值，尤其适用于对酸碱不稳定的化合物特 别是欲测组分易被某种酶分解时用超滤可除 去该酶，避免欲测物分解。 但超滤可能会由于欲测组分结合在膜上面影 响回收率。 （6）凝胶层析 利用分子大小不同的物质在流过凝胶固定 相的保留时间不同，大分子首先流出，小 分子最后流出，可将欲测小分子化合物与大 分子蛋白质分离。 由于欲测小分子化合物的浓度被流动相所 稀释，必要时还要进行浓缩后再用色谱分 析。 （（7）柱层析 用能吸附蛋白质的材料装填成小柱，使欲测蛋 白质的样品流过小柱，样品中的蛋白质被柱填 料吸附，欲测组分不被吸附，从小柱中流出。 这种小柱称为预柱。 预柱可以直接连在HPLC的进样装置上，含蛋 白质的样品通过预柱后可直接HPLC系统分析。 如分析尿中的某些代谢产物时，可将样品通 过预柱，除去蛋白质，直接进入HPLC分析。 (8)高速离心 原理：高速离心是根据物质沉降系数、质量、 浮力因子等不同，应用强大的离心力使物质分 离、浓缩、提纯的方法，是生物样品制备中常 用的分离方法之一。 在高速离心时蛋白质等生物大分子将首先沉淀在 离心管底部，不同分子量的蛋白质等生物大分子 沉降速度不同，也可按分子量大小沉降在离心管 的不同位置，这样就可以从离心管的不同位置取 出样品进行色谱分析。 注意： 在选择蛋白质的方法时要考虑欲测小分子 化合物的性质，所需除去的蛋白质的性质 及色谱分析时使用何种色谱技术； 最好是使用加热法、有机溶剂沉淀法、膜 分离方法和柱层析法。（不会引入新的干扰化合物，而盐析法将引入高浓度的盐，当这些盐对下一步色谱分析不干扰时可考虑盐析法，否则在除去了蛋白质后还要消除盐的干扰。） * 生物样品制备 一 生物样品采集及细胞破碎 生物样品指： 植物的花、茎、叶、根、种子 动物的体液：尿、血、唾液、胆汁、胃液、淋 巴液、其他分泌液 毛发、肌肉、组织器官； 各种微生物。 1 生物样品采集 1.1采样工具 生物样品采集与自然界中其他样品采集不同，可以用： 注射器吸取 手术刀、剪切割 1.2 注意事项 采样要有代表性(体液：几μL ，器官组织：几 mg); 采样时机； 采样部位准确； 采样后应立即加以处理，如采好血样后立即加抗血凝剂，组织器官加防腐剂，动物样品速冻处理，植物样品脱水处理。 采用工具需消毒，最好经过无毒处理。 2 细胞破碎 2.1 目的 破坏细胞外壳，使细胞内含物有效地释放出来。即：将生物体细胞内及多细胞生物组织中的待测组分(如激素、酶、基因工程产物等)充分释放到溶液中。 不同的生物体 同一生物体的不同组织 不同细胞破碎方法 比较柔软的组织（胰脏、肝脏、脑组织）：普 通匀浆器研磨 植物肉组织：一般研磨 含纤维多的植物组织：组织捣碎器捣碎或加砂 研磨 具有坚韧细胞壁的微生物：自溶、冷热交替、 加砂研磨、超声波或加压处理。 2.2 实验室中常用细胞破碎方法 细胞破裂 机械法 非机械法 液体剪切 固体剪切 脱水 溶胞作用 超声波 机械搅 研磨 压力 拌压力 杆、臼 Hughes 球磨机 压榨机 X压榨机 物理的 化学的 酶的溶菌 空气干燥 真空干燥 冷冻干燥 溶剂干燥 渗透冲击 阳离子和 酶和有 压力释放 阴离子 关的酶 冻结 洗涤剂 噬菌体 和融化 抗生素 溶胞 甘氨酸 抗菌素 (1)机械法 原理：通过机械切力的作用使组织细胞破