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- 2019-04-17 发布于贵州
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第一章 无菌操作技术实践第一节 微生物的分离和培养一二三四一二三四一二三四一二三四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四探究点一探究点二探究点三探究点四1 2 3 4 5 61 2 3 4 5 61 2 3 4 5 61 2 3 4 5 61 2 3 4 5 61 2 3 4 5 61 2 3 45 6情境导入课程目标大肠杆菌是人体肠道中普遍存在且容易培养的一类细菌,常作为分子生物学、遗传学和基因工程研究的重要材料,如何将大肠杆菌从混杂的微生物群体中分离出来并进行培养呢?1.掌握无菌操作技能,了解灭菌与消毒的区别。2.了解培养基的营养、种类及配制原则,能根据不同微生物的代谢特点配制不同的培养基。3.了解微生物的接种方法,掌握平板划线法的操作过程。4.能进行无菌技术的操作,能进行倒平板操作。5.能进行大肠杆菌的接种与分离培养。一、手提式高压灭菌锅1.实验室常用高温处理达到灭菌效果,包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法。2.手提式高压灭菌锅的使用包括加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等步骤。二、配制培养基1.培养基的概念为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质称为培养基。2.培养基的类型(1)天然培养基是指采用动植物组织或微生物细胞以及它们的提取物或粗消化物配制而成的培养基。其主要优点是取材便利、营养丰富、配制简便,缺点是营养成分难以控制、实验结果的重复性较差。(2)合成培养基是指由准确称量的分析纯等级别的高纯度化学试剂加蒸馏水配制而成的培养基。其优点是化学成分及其含量明确、实验的可重复性好,缺点是配制繁琐、成本较高。(3)各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等最基本的物质。配制固体培养基时,还需要在液体培养基中加入凝固剂,如琼脂。根据拟培养的微生物的不同需要,有时还要加入维生素等特殊的营养物质,并要调节培养基的pH使之满足微生物的生长需要。三、接种微生物1.接种的概念:在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。2.由于接种方法的不同,采用的接种工具也有区别,如用玻璃涂布器进行涂布平板接种,用接种针进行穿刺接种,用接种环进行斜面接种,或在固体培养基平板上进行划线接种等。四、大肠杆菌的接种与分离培养(一)配制牛肉膏蛋白胨培养基1.步骤:配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。2.灭菌和消毒(1)灭菌:采用强烈的物理学或化学方法使物体内外所有的微生物永远丧失生长和繁殖能力的方法。(2)消毒:用较为温和的物理学方法或化学方法杀死物体上绝大多数微生物的方法。(二)斜面接种和培养大肠杆菌斜面接种大肠杆菌的主要目的有菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。(三)平板划线分离和培养大肠杆菌1.在实验室中,平板常常被用来培养、分离细菌等微生物。2.在制作平板的过程中,一定要注意无菌操作。3.平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。培养基的成分与配置原则问题导引组成生物体的化学元素归根结底是从哪里来的?提示:组成生物体的化学元素归根结底是从无机自然界获取的。名师精讲微生物细胞的化学组成与其他生物的大体相同,也是由C、H、O、N、P、S以及其他元素组成的,其中C、H、O、N占细胞干重的90%以上,这些元素最终来自外界环境中的各种无机化合物和有机化合物。虽然培养不同微生物的具体培养基配方不同,但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等最基本的物质。1.培养基的营养营养要素含义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体细胞的物质和一些代谢产物,有些是异养生物的能源物质无机化合物:CO2、NaHCO3;有机化
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