植物分子育种之细胞工程.pptVIP

（一）微型繁殖技术 1）保持优良品种的遗传特性; 2）高效快速地实现种苗的大量繁殖,在短时间中获得大量的优质种苗. （二）作物脱毒 （三）人工种子 （四）单倍体育种 花药 花粉细胞培养 接种 脱分化 愈伤 组织 分化出 小植物 再分化 单倍体 植株 移栽 正常 植株 染色体加倍 （五）植物体细胞杂交 第四节 细胞工程在植物分子育种中的生物反应器大规模培养 1959年，图莱克（Tulecke）和尼 克尔（Nickell）首次将微生物培养用 的发酵工艺应用于植物细胞悬浮培养。 一、培养特性 1．植物细胞本身的特性 （1）植物细胞较大。 （2）培养体系有较多的大小不等细胞团。 （3）细胞壁在培养中易被搅拌器损伤。 （4）培养周期较长，分批培养为2～3周，半连续或连续培养为2～3月。防止污染较困难。 2．植物细胞培养液的流变特性 易结团，易分泌粘性物质。传氧速率降低，影响细胞生长。 3．植物细胞培养过程中的气体传递与影响 （1）氧的传递 （2）CO2的影响 4．泡沫与器壁表面黏附性 易产生泡沫，与器壁表面黏附性强，影响细胞生长，要尽量消除。 5．细胞分裂和愈伤组织的形成 3～5天:发生细胞分裂 两周后:愈伤组织的形成 将其转移至分化培养基上即可最终获得试管苗。 6．悬浮细胞生长与增殖 悬浮细胞分批培养中细胞生长周期也呈一条“S”形曲线。 培养周期：指具有一定起始密度的单细胞从开始培养到细胞数目和总重量增长停止这一过程。 培养周期包括： （1）延迟期 （2）对数生长期 （3）直线生长期 （4）减缓期 （5）静止期 （6）衰亡期 二、培养过程 1．细胞的驯化、筛选与细胞株的建立 大致步骤：外植体诱导愈伤组织→ 液体培养分散细胞→ 固体培养→ 液体培养（反复）→ 驯化、筛选细胞 2．扩大培养 3．生物反应器培养 包括三种培养方式： ① 分批培养 ② 半连续培养 ③ 连续培养 * 生物反应器的设计与选择 要求：具有合适的氧传递 良好的流动性 低剪切力 * 目前常用的3种生物反应器： 机械搅拌式生物反应器 鼓泡式生物反应器 气升循环式生物反应器 ① 机械搅拌式生物反应器： 优点：搅拌充分，供氧效果和混合效果好。 缺点：剪切力大，对细胞损伤大。 机械搅拌式生物反应器 搅拌式生物反应器 ② 气动式生物反应器： 优点：供氧剪切力小，对细胞损伤小，易长期无菌培养。 缺点：操作弹性小，低气速或培养后期混合效果差；此时如果提高通气量又会产生大量泡沫。 气升循环式生物反应器 气动式生物反应器 气升环流式生物反应器培养紫草细胞大致步骤： （1）原料来源 （2）反应器 （3）培养基：第一阶段:B5+IAA+KT 第二阶段:M9+IAA+KT 三、植物细胞生物反应器培养存在的主要问题 （1）搅拌或通气对细胞有损伤，泡沫产生、有益气体散失对细胞代谢不利。 （2）培养液粘度增加，影响细胞吸收营养及气体传递。 （3）反应器结构有缺陷。 （4）相关代谢机制不清楚。 谢谢！ 植物细胞按照培养对象分类： 单细胞培养 单倍体培养 原生质体培养 2、植物单细胞培养方法 (1)固体培养：是在微生物培养基基础上发展起来的植物细胞培养方法。一般添加一定比例的琼脂起固化作用。 (2)固定化培养：属于固体培养，指将游离细胞包埋在多糖或多聚化合物制备的网状支持物中，培养液呈流动状态的无菌操作技术。 (3)液体培养：也是在微生物培养基础上发展起来的。可分为: 振荡培养 旋转培养 静止培养 纸桥培养 (4)细胞悬浮培养：属于液体培养，指植物细胞或小细胞团在液体培养基中大规模进行培养。 (5)分批培养：又称成比培养，指在一个固定容积的培养基中培养细胞，当培养基中主要的营养物质耗尽时生长就停止。 (6)连续培养：在培养过程中由于不断注入新鲜培养基，故培养液中营养物质能够连续得到补充，培养物的容积一般是恒定的。 3、植物单细胞制备 （1）获得植物单细胞三种途径 由完整的植物器官分离单细胞的方法 由培养组织中分离单细胞 花粉 叶肉组织是分离单细胞的最好材料。 （2）．制备方法 机械法：指通过机械磨碎、切割植物体从而获得游离的单细胞。 优点：细胞不受酶伤害。 缺点：只适合于排列松散的薄壁细 胞、效率低、产量少。 1969年，Gnanam和Kulandaivelu用该方法分离出几种成熟叶片叶肉细胞。 酶解法：指用