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用阵列式SPR 传感器ProteOn XPR36 系统进行抗体开发和研究 进行抗体开发和研究，不管是完整的单克隆抗体分子还是Fab、scFv ，我们需要了解抗体分子的表 达量、亲和力、反应动力学（特别是解离速率koff ）以及抗体的其它特性如亚型、特异性等等。使用传 统的ELISA 方法筛选抗体，通常只能先看哪些克隆有表达，然后把表达水平较高的克隆挑出来进一步研 究。这种方法筛选抗体，速度虽然快，但充其量只能知道大致的表达水平，其余所有的信息都必须进一 步研究，对后续的工作带来很大压力，而且常常会丢掉虽然表达水平不高，但抗体亲和力、特异性等非 常好的克隆。 后来，人们尝试用一些新的手段来筛选抗体或 抗体片段，其中较常用的是SPR 技术。SPR 生物 传感器技术问世以来，它的通量一直成为问题，测 定抗原-抗体反应动力学数据通常需要数小时时 第一步，横向6 个通道上标记捕获试剂，即可 间，远远达不到抗体筛选的要求，而通量较高的产 以和单抗结合的分子，如Anti-mouse IgG 、Protein 品的价格又贵得几乎能令世界上最奢侈的实验室 A/G 等，如果筛选抗体 Fab 段，可以标记 望而却步，所以大多数拥有SPR 传感器的实验室 通道旋转90°变成纵向， Anti-(Fab’)2 。标记完成后， 只是拿它来做后期的抗体特性分析。前期的筛选阶 进入第二步。 段还是采用ELISA 方法。 第二步是从细胞培养液中捕获单抗，一次最多 现在 Bio-Rad 公司推出的一种新型阵列式 流过6 个克隆。如果表达有单抗，仪器会显示出一 SPR 生物传感器技术有望彻底打破现有方法的各 条向上的曲线，并且浓度越高，曲线上升得越快。 种瓶颈，做到较高通量的基础上同时获得浓度、亲 如果定义了标准曲线，可以把浓度数值算出来。这 和力以及反应动力学等相关数据。这种新型阵列式 一步完成后，抗体或抗体片段就结合在了捕获试剂 SPR 生物传感器叫ProteOn XPR36 系统。如下图 上。 所示，它具有可90°旋转的6 通道流动池，可在芯 片上产生纵向或者横向的通道各6 条。首先，流动 第三步，通道再转回横向，流过5 个不同浓度 池旋转成纵向，在纵向的6 个通道里可以标记最多 的抗原分子加一个缓冲液作为阴性对照。这一步可 6 种不同的ligand 在芯片上，随后流动池旋转90° 以得出下图右下方所示的6 幅动力学反应曲线，分 变成横向，流过6 个analyte，当analyte 溶液接 别代表6 个克隆的单抗和抗原反应的结果，我们可 触原先标记的 ligand 时发生的相互作用即可被检 以据此计算出6 个抗体和抗原的动力学数据和亲 测并记录下来。通过这样的分析方式可以实现高通 和力常数。 量平行分析。 第四步，用磷酸或pH2.0 的甘氨酸溶液再生， 使用ProteOn XPR36 系统进行抗体筛选和优 把抗原连同抗体一块儿从捕获试剂上洗下来，为检 化，Bio-Rad 公司给出了一个完全不同于传统方法 测下一批单抗做准备。