回收自体血中脑膜瘤干细胞 检测的初步研究-临床医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 摘 摘 要 回收自体血中脑膜瘤干细胞检测的初步研究 研究生 李晓培 导 师 胡强夫 教授 郑州大学第五临床学院 外科学 郑州 450052 摘 要 目 的 通过回收脑膜瘤手术野流失的血液，并进行抗凝、滤过、离心、洗涤及净 化，将得到的红细胞悬液进行光学显微镜观察和流式细胞仪检测，明确红细胞 悬液中脑膜瘤干细胞的含量，评估自体血回输技术的安全性，为其在脑膜瘤手 术治疗中的临床应用提供试验依据。 方 法 选取 2014 年 06 月～2015 年 12 月，于郑州大学第五附属医院择期进行手术 治疗的脑膜瘤患者 89 例，其中因患者及家属拒绝使用自体血回输、合并颅内感 染或 ASA 分级Ⅲ级以上等原因剔除 19 例，最终入选脑膜瘤患者 70 例。自手术 切皮至缝皮实施血液回收，严格遵照血液回收、清洗、回输流程进行操作。选 取分离切除脑膜瘤时的肿瘤组织出血（B1）、储血罐内收集的血液（B2）、经离 心及洗涤后的血液（B3）三组标本，用推片法将三组血液标本分别制成血细胞单 层排列的血涂片，干燥后在光学显微镜下观察并辨认细胞形态。制备 B1、B2 及 B3 血液标本，分别使用流式细胞术直接免疫荧光法检测其 CD133、CDl66 的阳 性表达情况，并建立二维点图。术中取肿瘤组织，固定、石蜡包埋并切片，应 用苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）进行免疫组化染色，在 镜下观察、诊断肿瘤组织类型，并采集图像。 I 结 果 70 例患者平均年龄 52.87±17.29 岁，男性 37 例（52.86%），女性 33 例 （47.14%）。ASAⅡ级患者 22 例（31.43%），ASA Ⅲ级患者 48 例（68.57%）。 术中共回收自体血 25176ml，每例患者平均回收自体血 359.66±169.72ml。在光 学显微镜下可见：B1 血涂片含有大量的组织碎片、破坏的细胞基质、游离的血 红蛋白等组织，但未观察到异常形态的肿瘤细胞。B2 血涂片中组织碎片、破坏 的细胞基质、游离的血红蛋白等组织显著减少，但含有部分形态异常的红细胞。 B3 血涂片红细胞大小一致，变化均一，镜下未见其它异常形态细胞及组织碎片 等。所有患者的病理结果均为脑膜瘤，脑膜瘤病理分型不同，其镜下的形态结 构亦存在相应差异。经流式细胞术检测分析显示：B1 血标本中，CD133 的阳性 表达率为 0.54%，CD166 的阳性表达率为 3.46%，CD133 及 CD166 均为阳性的 表达率为零；B2 血标本中，CD133 的阳性表达率为 0.43%，CD166 的阳性表达 率为 3.58%，两者均为阳性的表达率同样为零；B3 血标本中，CD133 的阳性表 达率为 0.39%，CD166 的阳性表达率为 2.75%，CD133 及 CD166 两者均为阳性 的表达率为零。 结论 经自体血回收机过滤、离心、分离、洗涤及净化后收集到的红细胞悬浮液中， 未发现脑膜瘤干细胞，初步认为回输给患者具有一定的安全区间；回收式自体 血回输技术在脑膜瘤手术中的应用，可以有效节省血液资源，缓解目前血源紧 张的局面，值得临床推广。 关键词：自体血回输 脑膜瘤 流式细胞术 CD133 CD166 II Ab Abstract A preliminary study of detecting meningioma stem cells in salvaged autologous blood Postgraduate. Xiaopei Li Tutor Prof. Qiangfu Hu Department of Surgery Fifth Clinical College of Zhengzhou Univ