回族Lynch综合征家系分析及基因检测-外科学(胸外科学)专业论文.docxVIP

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万方数据 万方数据 原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研 究所取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他 个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人 和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者: 日期: 年 月 日 学位论文版权使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后遵守此规定。 学位论文作者: 日期: 年 月 日 摘要 摘要 回族 Lynch 综合征家系分析及基因检测 研究生 解澎 导 师 任景丽、杨鲲鹏 郑州大学第二附属医院 胸外科 河南 郑州 450014 摘要 研究背景与目的 结直肠癌(又称大肠癌)为常见的消化道恶性肿瘤。在欧美发达国家发病 率较高,近年来随着我国人民饮食结构的变化和环境的改变,国内发病率也逐 年攀升,目前,每年有约 25 万新增患者。占我国恶性肿瘤发病率的第 4 位,死 亡率占全部恶性肿瘤死亡率的第五~六位。极大的威胁着我国人民的身体健康。 Lynch 综合征既往称为遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC),是一种重要的 结直肠癌亚型,特点是家族性遗传聚集,发病率约占所有结直肠癌的 2%-3%。 为常染色体显性遗传疾病,外显率接近 80%。其发病的主要的分子生物学基础 为错配修复基因(MMR)种系突变。 Lynch 综合征在临床发病特点和疗效以及预后等方面都有别于散发性结直 肠癌,且 Lynch 综合征家系内成员患癌及复发风险较高,因此,及时对疾病做 出准确的诊断,有利于指导患者的临床治疗及家系成员的早期预防。 传统的诊断方法高度依赖家族史及临床病理特点的分析,且各种临床诊断 标准很难在特异性和敏感性上达到兼顾。目前家庭小型化趋势明显,这对家族 史的分析带来很大影响。随着基因技术的发展,基因诊断逐步得到广泛应用, 具有快速、准确、便捷的优势,Lynch 综合征发病机制起源于基因缺陷,因此基 因诊断成为本疾病诊断中最为重要的一环。2015 年美国临床肿瘤学会(ASCO) 发布的遗传性结直肠癌综合征临床实践指南中指出,Lynch 综合征的诊断应结合 MMR 蛋白免疫组织化学检测和 MSI 分析以及基因突变检测。 本研究在临床中发现了 1 例大型回族 Lynch 综合征家系,对该家系图谱进 I 行连锁分析,为常染色体显性遗传。拟通过 DNA 测序的方法检测家系患者肿瘤 组织微卫星不稳定性,通过免疫组织化学了解患者肿瘤组织的常见的 MMR 基因 的表达情况,并对发现表达缺陷的 MMR 基因直接测序,寻找致病突变位点。以 期发现新的 MMR 基因突变位点,为 Lynch 综合征的基因诊断和发病机制研究增 添新的数据支持。 材料与方法 1 研究对象 回族 Lynch 综合征家系 1 例,家系成员现存 6 代,结直肠癌患者 14 人,其 中结肠癌患者 12 人,直肠癌患者 3 人。有 1 例患者为直肠癌术后患结肠癌。患 者中 7 人已逝,7 人健在。家系肿瘤发病分布符合孟德尔遗传定律,属常染色体 显性遗传。所有患者均经三甲医院病理检测明确诊断。 2 研究方法 签署知情同意书,对家系中所有成员进行问卷调查,每个成员收集 5ml 外 周血,所有患者同时收集肿瘤组织。采用免疫组织化学染色检测 6 名患者肿瘤 细胞中错配修复基因(mismatch repair genes, MMR)的表达,聚合酶链式反应 (PCR)扩增和 DNA 测序检测患者肿瘤细胞 DNA 微卫星不稳定性(microsatellite instability ,MSI)以及 MMR 基因突变。 结果 1 .本家系共有 14 例结直肠癌患者,健在 7 例患者。家系中存在三位患者互 为 1 级亲属的现象,患者结直肠粘膜均未发现多发性腺瘤性息肉。家族中连续 3 代均有发病。有明确诊断年龄的患者中,有 7 未患者诊断年龄小于 50 岁,其中 最小为 32 岁。经分析,该家系符合 Amsterdam 诊断标准。 2. 经过对患者Ⅳ1、Ⅳ8、Ⅳ15 微卫星位点的直接测序分析,3 名患者肿瘤 组织 DNA 均表现为 MSI-H。 3. 免疫组织化学切片经镜下观察,结果显示:患者Ⅳ1、Ⅳ8、Ⅳ15 肿瘤组 织 MLH1 蛋白均为阴性,MSH

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